• Santé - Activite enzymatique, Enzyme, Substrat

[Biochimie] inhibiteurs enzymatiques

j'ai essayé de faire un sujet de partiel dont je n'ai aps la correction qui demande de discuter les avantages d'utiliser des inhibiteurs compétitifs ou non compétitifs pour faire de la thérapie au niveau d'une enzyme impliquée dans une voie métabolique. je ne vois pas trop les avantages de chacun des 2 types d'inhibiteurs.  [...] l'inconvénient, c'est que si la cellule compense l'inhibition de l'enzyme en augmentant la biosynthèse du substrat, l'effet sera perdu. Par contre, cela constitue également un moyen d'intervenir, imaginons que le blocage de l'activité enzymatique par l'inhibiteur soit trop important et devienne délétère pour le patient, on peut intervenir en injectant du substrat.  [...]

Enzymologie

De plus, je voudrai savoir comment mesure t'on une activité enzymatique et si la vitesse initiale dépend de la concentration en enzyme mais aussi de la concentration en substrat.  [...] kcat est la constante catalytique. elle nous montre la rapidité de l'enzyme. Une kcat élevée est synonyme d'une enzyme catalysant très rapidement une réaction (exemple. kcat de la superoxyde dismutase = 1.10 6 donc cette enzyme transforme 1 million de molécules de Substrat par seconde.).  [...]

cinétiques atypiques

lorsque je mesure l'activité enzymatique d'un substrat avec des enzymes recombinantes j'obtiens ceci.  [...] donc forcément l'équation de MM ne convient pas. J'ai essayé avec une équation (inhibiteur non compétitif) comme conseillé pour les inhibitions par excès de substrat. Mais j'obtiens des valeurs abhérantes de km et vm (même si j'ai un R correct).  [...]

[Biochimie] préparation d'une gamme etalon

En faite je dose une activité enzymatique avec un réactionnel composé de 125 µl de tampon, 50 µl de solution enzymatique et 75 µl de substrat pNP-glycoside.  [...] Le milieu réactionnel est incubé à 37°C pendant 10 min. La réaction est arrêtée par ajout de 2 ml de carbonate de sodium (2 %, p/v). L'activité enzymatique se manifeste par l'apparition d'une coloration jaune caractéristique du paranitrophénol (pNP) libéré dans le milieu.  [...]

[Biologie Cellulaire] substrat de la phosphatase alcaline

J'aimerais savoir quelle est le nom du substrat utilisé en histo pour révéler la phosphatase alcaline et s'il est possible de l'utiliser directement sur une coupe pour détecter l'activité enzymatique.  [...] merci j'ai finalement trouvé le substrat et effectivement il faut être à un ph alcalin pour que le produit de réaction soit ionisé (ce qui lui donne sa couleur jaune). Mais je voudrais savoir si quelqu'un a essayé le traitement d'une labteck avec ce réactif et s'il est possible de voir ainsi l'activité de la phosphatase.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

L'activité enzymatique est dosée en premier lieu au niveau du filtrat de culture (50 ml de culture) et puis ensuite aprés avoir précipité ces 50 ml pour aboutir à la fin a 5ml de précipité.  [...] Normalement l'activité enzymatique correspand au nombre de micromoles dégradé du substrat par millilitre et par minute.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

Je bosse sur un article de biochimie sur le rôle des cystéines dans une enzyme, et pour vérifier certaines choses, les auteurs ont fait une analyse par immunoblotting.  [...] Ainsi, ils font plusieurs expérience sur l'activité enzymatique, pour arriver aux conclusions qu'il n'y a pas de ponts disulfides et que finalement si on les mute en alanine il n'y a pas de baisse de l'activité enzymatique et si on ajoute des agents chimiques modifiant les thiols, alors une seule cystéine provoque une baisse de l'activité (donc supposition que cette cystéine est proche du site de liaison au substrat, et qu'il y a encombrement stérique quand agent chimique NEM est lié à cette cystéine).  [...]

La mesure de l’activité enzymatique par spectrophotométrie et sa relation avec l’NAD

Je comprends que lors de l'étude de l'activité enzymatique d'une enzyme, si les substrats et les produits n'ont pas d'absorbance cela implique la mesure de l'absorbance d'un coenzyme impliqué dans la même réaction enzymatique. Mais je n'arrive pas à assimiler le suivant.  [...] Si par exemple, dans une réaction, l'un des produits absorbe dans l'UV à 280 (comme toutes les protéines ) mais on a aussi un conezyme NAD impliqué dans la réaction et qui absorbe à 280 nm et à 340 nm aussi, alors lequel des deux serait utilisé pour l'étude de l'activité de cette enzyme par spectrophotométrie Pourquoi.  [...]

coloration avec o-dianisidine

donc je me suis dit que c'est peut-être quelque chose de très basique lorsqu'on pratique la phytopathologie et qu'il me manquait simplement des notions.   [...] ils utilisent l'o-dianisidine egalement autre part dans l'expérience, mais comme substrat pour détecter l'activité enzymatique sur des gels (pas dans le mycelium) et là ils en parlent (un peu) dans methods & materials mais rien de bien précis pour le néophyte que je suis.  [...]

petite question sur la dénaturation d'une protéine

La dénaturation est liée à la structure de la protéine, à la présence de fonctions ionisables ou non. A mon avis si on retire l'agent cahotropique et qu'il n'a pas modifié ces liaisons, certaines pourront reprendre leur état fonctionnel. En plus, est ce qu'il n'existe pas des protéines chaperonnes, pas systématiquement mais qui aident au bon repliement de la protéine Si quelqu'un à des infos, ça m'interrese aussi.   [...] Je me rappelle d'une expérience faite en première. on avait des enzymes et on devait en faire chauffer certaines (à 60°C puis 100°C je crois) et congeler d'autres. Ensuite on vérifiait si elles conservaient leur activité sur un substrat. On faisait ça en analysant leur produit par chromato sur couche mince (CCM pour les érudits ) Et le résulatat était que celles qui avaient été congelée retrouvaient leur activité enzymatique, alors que les autres étaient définitivement dénaturées.  [...]