• Santé - Activité, Dosage, Protéine

[Biochimie] Protocole de purification d'une protéine, vos avis

Ce serait bien de décrire comment est mesurée l'activité, ainsi que la méthode de dosage de protéine. Et il faudrait mesurer l'activité et la quantité en protéine à chaque étape, avant le sulfate d'ammonium, après.  [...] Je ne connais pas ma quantité de protéine dois-je réaliser une gamme étalon pour déterminer les quantité de protéines de mes solutions.  [...]

[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

[Biochimie] Biochimie > Enzymologie > constante de Michaelis (Km)

B- Sachant que le dosage de protéine donne un résultat de 2,8 mg/ml pour l'échantillo, enzymatique, calculez l'activite spécifique de l'échantillon ( j'ai trouvé 23,92 UE mg-1).  [...] 2ème question. La théorie d'Ogston montre que le substrat se fixe sur le site actif en 2 ou 3 points d'ancrage et qui explique la stérospécificité de l'enzyme.   [...]

[Biologie Moléculaire] co transfection??

Vous transfectez votre vecteur codant pour votre facteur de transcription avec un autre vecteur portant, lui, une séquence promotrice sur laquelle peut se fixer votre protéine d'intérêt et codant pour une protéine rapportrice dont vous quantifierez la présence de la manière qui vous semblera la plus appropriée (dosage d'activité enzymatique, ELISA, réaction colorée, etc...).  [...] -on transfecte une construction permettant l'expression constitutive d'une protéine capable de transformer un composé X en lumiere A. c'est ton controle de transfection qui te servira a normaliser l'efficacité d'entrée de la construction.  [...]

[Biochimie] Purification de la catalase du foie de rat.

On réalise une dénaturation des protéines pour les détruire sauf la catalase. On réalise des fractionnements sur une colonne d'hydroxylapatite et on mesure l'activité catalasique et l'absorbance pour vérifier la pureté. Je n'ai pas vraiment saisi l'intérêt de cette purification et du TP.  [...] Je pense que le but était tout simplement de vous montrer comment on procède pour l'étude d'une protéine (purification, dosage, test d'activité...). Et la catalase a dû être choisie parce que les personnes qui vous font ce TP ont un protocole déjà préparé pour cette enzyme.  [...]

Contrôle du metabolisme carboné de l'orge!?

Il s'agit en fait d'un Tp ou des plants sont mit en culture dans un milieu nutritif enrichi à différentes concentrations de NaNO3.   [...] Il a été fait des mesures de l'activité PEPC, SPS, dosage des protéines solubles, de l'amidon, sucres solubles, dosage des AA, et du nitrate.  [...]

[Biochimie] Triton X 100

Si quelqu'un parmis vous à la réponse. j'aurais besoin de connaître le mode d'action et le rôle du triton X 100 sur une protéine. et si il possède une activité scpetrométrique susceptible d'interférer avec un dosage protéique par spectro.  [...] Pour les dosages BCA à faible concentration il n'interfère pas, mais souvent des tableaux sont vendus avec le kit de dosage reprenant les interactions éventuelles avec les principaux détergents. Tu trouveras à coup sur le triton x-100. Si tu l'utilise attention aux mains et aux yeux c'est très très agressif même si ça n'en n'a pas l'air.  [...]

Matériels et méthodes | Dossier

La cytotoxicité de la molécule à tester est évaluée par le dosage de l'activité enzymatique de la lactate déshydrogénase (LDH) du surnageant cellulaire d'une suspension de granulocytes neutrophiles (5.10 6 GrN/ml) incubée à 37°C avec l'inhibiteur à différentes concentrations.  [...] Pour être utilisée dans l'étude de liaison ou dans la mesure d'activité, il est nécessaire de quantifier la protéine kinase C, ceci est fait par un dosage de Lowry. Pour cela, une gamme étalon est réalisée en utilisant une solution de sérum albumine comme source de protéines, chaque tube de cette gamme et chaque tube échantillon à doser faisant 0,5 ml.  [...]

[Biochimie] Dosage de protéine

Je voudrais savoir quelle méthode vous me proposez pour réaliser un dosage de protéine dans une dispersions de gomme arabique autre que le dosage de Bradford.  [...] Moi je fais a la guanidine 6M, elle dénature la protéine, dosage a 280nm et ensuite je vais chercher le epsilon sur Expasy a partir de la sequence de la proteine, et enfin avec Béer Lambert on retombe sur ses pattes.  [...]

[Biochimie] B-Galactosidase d'origine vegetale

3- Par la suite, pour les etapes de chromato. Je vais utiliser une chromato d'echangeur d'ions CM-Bio gel suivi d'une second chromatographie cette fois ci d'affinite (Lactosyl Sepharose). Comment savoir quoi utiliser. le tampon, la quantite de resine,la quantite d'echantillon.   [...] 2- dosage de protéine et courbe standard par méthode de lowry et la méthode d'estimation de la consentration en protéines par mesure d'absorbance en UV.  [...]