• Forum - Western, Tampon, Transfert

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

Si tu est vraiment très stricte quand au pH que tu a veu ça ne prend pas trop de temps de voir ton pH mais c'est pas d'une grande utilité c'est juste un tampon de transfert.  [...] Pour répondre au dernier message, pour ma part lors des transferts de ma protéine de 26kDa que je faisais sur membrane PVDF avec le même tampon ou très très proche. Je ne dépassais pas les 25 V mais pendant 50 minute-1h. Maintenant, je t'avoue je n'ai jamais essayé autant de volt et temps pour un transfert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot

Je voudrais savoir ce qu'il arriverait si on interverti le tampon de migration avec le tampon de transfert Donc ma question est. les tampons jouent-ils un role primordial dans le Western.  [...] NB. j'ecris avec un clavier qwerty aussi veuillez m'excuser pour l'absence d' accent.   [...]

[Biochimie] Comment optimiser le transfert (en western blot) des protéines de haut poids moléculaire ?

Il n'y a pas de tampon de transfert étant donné que c'est un transfert à sec. Une fois que ton gel a migré, tu utilises un appareil spécial pour cela et en quelques minutes, c'est transféré. Ca revient un peu plus cher que la méthode classique (7 à 8 euros par transfert de mémoire) mais pour les grosses protéines ça marche largement mieux.  [...] 4-Pour le transfert proprement dit, tu m'avais dis qu'il n y avait pas de tampon et que les conditions étaient déjà pré-établies, peux tu STP regarder sur ta machine et me dire quelles sont ces conditions (temps, voltage ou ampérage).  [...]

[Biochimie] Electrophorèse : volts, ampères ou watts?

Concrètement qu'en est-il Pour une électrophorèse que dois-je regarder comme valeur Car d'un tampon de migration à l'autre, la conductivité change et un même nombre de volt donnera un nombre d'ampère fort différent.  [...] Il s'agissait d'un transfer gel SDSpage sur membrane pour un Western Blot. J'ai été obligé de modifier le tampon de base et rajouter plus de glycine. Donc la conductivité a pas mal augmenté.  [...]

[Immunologie] immunoblote

C'est comme un western blot sauf que la méthode de transfert est différente.  [...] Pour le western c'est un transfert électrique des protéines alors que l'immunoblot c'est un transfert qui se fait sous vide de pression.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot Transfert sur membrane

Ha ben c'est peut être juste des traces de tampon de charge et pas un over transfert... mais bon j'y crois moyen. Je révèle ma membrane demain après passage à l'anticorps secondaire. La dernière fois j'avais rien.  [...] es ce que tu pourrais nous donner la composition de ton tampon de transfert meme si je doute que le problème vienne de la étant donnée que le marqueur passe bien.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western Blot: Transfert incomplet

Au début j'utilisais un tampon de transfert contenant 20% de Méthanol avec 25 mM de Tris Base et 190 mM de Glycine. J'ai entre temps diminuer la concentration de Méthanol à 10% et j'ai donc observé un meilleur transfert. J'ai aussi essayé avec des gel de 0.  [...] Je compte essayer demain un transfert overnight et peut être essayer avec un tampon de transfert sans méthanol. Donc si quelqu'un à une idée je suis preneur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ampérage d'un transfert western blot

Voilà deux semaines que je réalise des transferts sur membrane PVDF de gel 2D. Le transfert se déroule sur toute la nuit à 4°C à voltage constant (30V).  [...] Ma question est donc simple. pourquoi cette augmentation de la résistance Le tampon de transfert aurait-il changé durant la nuit Se serait-il chargé en sels.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon SDS-PAGE

Son utilité est de dissocier le SDS de la protéine afin que celle-ci puisse interagir avec la nitrocellulose ou le PVDF, et y rester fixée. Pour cette raison, il est important que le pH du tampon de transfert soit entre 8 et 8,5 pour que la protéine migre bien vers la membrane puisque sans SDS elle migre selon ses propres charges et non plus celles du SDS qui l'entouraient.  [...] Juste une petite question, est il possible que sur un western blot, si le tampon de charge est un peu vieux (donc que je n'est pas rajouté de B-mercapto avant de l'utiliser mais qu'il sent encore bien fort) il y ai des pont S-S qui aient résisté.  [...]

[Biochimie] Western blot

Lorsque je travaillais sur BRCA1 (230 kDa), un transfert qui marchait bien après migration sur polyacrylamide 6% avec stacking (4%).  [...] Cependant une personne de mon équipe a réalisé un transfert d'une très grosse protéine (. 300 kDa) et il a un tampon de transfert adapté, pris d'une publie. Il réalise son transfert à 20V à 4°C et a noté une nette amélioration du transfert des marqueurs de haut poids moléculaire comparé aux méthodes classiques.  [...]