• Forum - Western, Quantité, Protéines

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot

Pourriez m'expliquer comment on fait pour normaliser une quantité de protéines lorsqu'on réalise un western blot, je sais qu'il faut utiliser des protéines comme la béta tubuline mais techniquement on fait comment.  [...] Même si le western n'est pas une méthode quantitative il est aussi possible de mesurer l'intensité de tes bandes avec un logiciel, et de normaliser ta prot d'interêt par rapport à ta protéine contrôle mais en général on se contente du visuel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Biochimie: méthode de Western Blot

En fait, doser les protéines avant un Western blot permet de déposer la même quantité de protéines dans chaque et pour chaque échantillon.  [...] Ainsi, si tu as deux échantillons identiques, mais que tu déposes deux quantités différentes de protéines, les deux bandes auront une intensité différente. Ce qui peut fausser les conclusions (genre. mon echantillon 1 a plus de protéines que le 2, donc le 2 produit plus efficacement).  [...]

[Biochimie] qualité protéines

Je réalise des tests de vieillissements tissulaires et regarde la dégradation au niveau ARN et Protéines.  [...] En ce qui concerne les Protéines, après extraction sur une même masse de tissus je ne vois pas de différence au niveau quantité (je m'y attendais) ni au niveau visuel (gel coloré au bleu de Comassie / bandes majoritaires). Il existe-t-il une protéine témoin de qualité à mettre en évidence en Western.  [...]

western-blot

je suis entrain de faire des western sur des mutants afin de voir la différence d expression d une protéine dans ces lignees. Or je suis obligé pour cela de précipiter mes protéines sinon je n ai pas les quantites suffisantes.  [...] Je fais également des western blot et j'ai le même problème que toi. je resuspend mes protéines directement dans le tampon de charge donc je ne peux pas quantifier la quantité de protéines que je dépose sur gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot "semi-quantitatif", pourquoi??

J'utilise la technique du western blot afin de quantifier mes protéines d'intérêt (par chemiluminescence, révélation par l'ECL+ et analyseur d'image permettant de quantifier mes blots), mais une question se pose à moi. pourquoi dit-on du western blot que c'est une technique semi-quantitative Quelles sont les limites de la quantification.  [...] Il est possible en western blot d'observer des variations de quantité de protéines, mais il faut être prudent pour éviter les biais méthodologiques. par exemple quand j'en faisais, j'utilisais comme référence la quantification d'un de mes échantillons, le même tout au long de la manip, je déposais chaque échantillon en double avec 2 concentrations différentes (ce qui me permettait de vérifier la proportionnalité entre mes 2 dépôts.  [...]

[Biochimie] Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI

Normalisation de la quantité de protéine Western Blot chez E.COLI.  [...] je voudrai connaitre quelles sont les protéines chez E.coli qu'on utilise pour pouvoir normaliser une protéine d'intérêt (comme l'actine chez les eucaryotes).  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Pour les techniques de marquage métabolique ou de western, les questions ne sont pas du tout les mêmes. L'un permet d'estimer la quantité de protéine synthétisée (attention aux protéines instables et rapidement dégradée), l'autre c'est la quantité de protéines présente à un temps donné (néosynthèse ou pas, dégradation ou pas).  [...] En fait, je crois que la PCR quantitative est plus fine pour quantifier, mais comme le northern, cette technique va m'indiquer la quantité de proteine présente à un temps t, or je veux connaitre le taux de transcription d'un ARN et pas sa concentration.  [...]

[Biochimie] Ratio de Western Blot

Ma question porte sur un Western Blot, j'ai un exercice. un western blot qui me présente les quantité de différentes protéines dans une cellule. Ma valeur de référence est établie par la E-cadhérine. Mon problème est que 2 protéines sont présentées, avec une même intensité.  [...] En western blot, après quantification, on ne peut comparer deux bandes entre elles que s'il s'agit de la même protéine, révélée par le même anticorps primaire et secondaire et que la quantification est normalisée par le témoin de dépôt.  [...]

[Biologie Cellulaire] ultracentrifugation et cellules!

je voudrais réaliser des ultracentrifugations différentielles afin de déterminer la localisation d'une protéine spécifique qui m'intéresse. mais au lieu de le faire sur tissu, j'aimerais le faire à partir de culture de HEK. Auriez vous une idée du nombre de cellules dont j'ai besoin pour avoir au final une quantité de proteine suffisante pour faire des western.  [...] Tout dépend du compartiment cellulaire que tu veux isoler, de la représentation de ta protéine dans ce compartiment...Donc c'est par l'expérience que tu sauras quelle quantité de cellule te permet d'avoir une bande convenable en western. Pour commencer tu peux essayer plusieurs conditions où tu auras mis un nombre croissant de cellules.  [...]

[Biochimie] protéine permettant de normaliser un western blot

Je travaille actuellement à quantifier des protéines sur western blot et pour celà j'ai besoin d'une protéine me permettant de normaliser... J'ai utilisée l'actine (il y en a probablement la même quantité dans outes les cellules mais mes résultats me semblent un peu érronné je voudrais donc savoir si quelqu'un utilise un normalisateur d'equerre pour ce genre de manip.  [...] je détecte une protéine du cytosquelette plus particulièrement du sarcomère. la calpaine 3, et ce que je crains c'est la variabilité de cette actine en tant que normalisateur, je ne peux pas non plus utiliser comme toi erk total ça ne s'appliquerait pas à la calpaine 3, je vais tester labéta caténine et la desmine. Merci.  [...]