• Forum - Volume, ADN, éthanol

[Biologie Moléculaire] travaux pratiques, isolation plasmide

L'éthanol 70% permet de faire précipiter l'ADN. On utilise d'abord de l'éthanol 96% (ou plus concentré) car on le rajoute en général à un volume de solution aqueuse qui contient l'ADN (souvent après une étape de phénol-chloroforme) et qui va diluer un peu l'éthanol.  [...] On rajoute un volume suffisant d'éthanol concentré pour obtenir une concentration finale à environ 70%. On centrifuge alors pour faire tomber l'ADN au fond du tube, on enlève le surnageant et on mets ensuite de l'éthanol à 70% directement, car il n'y a plus de solution aqueuse pour diluer l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Pour le phenol, il se trouve qu'avant il fallait le saturé soit même et maintenant il s'achète tout fait, enfin saturé quoi. Pour l'extraction d'ADN on utilise du phénol saturé avec du tris et pour l'extraction d'ARN avec de l'eau. A ce que l'on m'a dit, les ARN reste dans la phase aqueuse et les protéines resteraient dégradées à l'interphase.  [...] Un volume d'éthanol 100% froid est ajouté au surnageant afin de précipiter l'ADN plasmidique pendant 5 minutes à température ambiante. Après 5 minutes de centrifugation à 10000 g, le surnageant est éliminé et le culot est lavé dans une solution Tris 0,1 M / éthanol 70% puis dans l'éthanol 100%.  [...]

[Biologie Moléculaire] precipitation ADN

Dans mon protocole pour precipiter de l ADN, on me dit de precipiter a froid avec NaCl et ethanol100 puis apres centri tout ça, de rincer avec de l ethanol70...et je suis pas sure de savoir a quoi ça sert, et pourquoi pas de l ethanol100.  [...] Ce qui doit être écrit dans votre protocole c'est que l'on reprend un volume V d'ADN dans 2V d'éthanol absolu non Si l'on fait le calcul, la concentration finale en ethanol est ~70%.  [...]

[Biologie Moléculaire] Alcool isoamylique

L'isoporopanol peut effectivemet être remplacé par l'éthanol, mais à 100%et non 70%. L'avantage de l'isopropanol par rapport à l'Ethanol est de pouvoir deshydrater l'ADN avec un volume moindre d'alcool. C'est pour cela que lors d'une précipitation à l'éthanol on rajoute 2 volumes d'Ethanol 100% pour 1 volume de solution contenant l'ADN (ce qui donne 70% env.  [...] d'Ethanol en concentration finale), et pour l'isopropanol, en général 1 volume suffit. Cela peut être pratique si on a plus de 500ul de phase acqueuse et que l'on ne dispose que d'eppendorf de 1.5ml (0.5 + 2*0.5 = 1.5 ml total).  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.  [...] Après tu ajoute 1volume équivalent (0,3 ou 1 ml suivant le nombre des cellules) de phenol/chloroform/alcool isoamylique. Centrifuge 10 min à 1700g. Après tu transfert la phase aqueuse dans un nouveau tube et tu ajoutes 1/2 volume d'acétate d'ammonium 7,5M et 2 volume d'éthanol 100%, l'ADN devrait précipité immédiatement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN par les sels (salting out)

Pour être plus précise une fois l'éthanol à 70% ajouté je devrais obtenir la méduse de couleur blanchâtre or que j'ai eu quelque chose de pas visqueux comme l'ADN et de couleur bleue ce qui 'a beaucoup surpris. J'ai quand même fait une électrophorèse et j'ai obtenu une trainé peut être une contamination.  [...] 11. Ajouter 2 volume d'Ethanol absolu 100% glacé et mélanger doucement par retournement jusqu'à apparition de la méduse d'ADN.  [...]

[Identification] Extraction d'ADN

Homogénéiser doucement le contenu de l'Erlenmeyer, puis transférer 10 mL de ce filtrat dans l'éprouvette. Ajuster ensuite le volume jusqu'à 40 mL avec la solution froide d'éthanol à 90° (verser très délicatement et lentement la solution d'éthanol).  [...] Pour la question 3, je ne saurai pas décrire exactement le rôle de chaque produit. Par contre je pense que l'éthanol permet de cristaliser une fois mélanger avec le contenue afin de faire apparaitre l'ADN.().  [...]

[Génétique] Précipitation de l'ADN dans l'éthanol, pourquoi une T° basse?

J'aimerais savoir pourquoi le rendement de la précipitation de l'ADN dans de l'éthanol augmente lorsque l'on baisse la t°.  [...] Il a été montré qu'on pouvait précipiter l'ADN a temperature ambiante avec la meme efficacité qu'a -20°C. Cette croyance proviens du fait que l'ethanol deviens plus visqueux a basse temperature, mais ca n'a pas d'influence sur l'efficacité de précipitation.  [...]

demande d'infos!!! extraction de l'ADN

Quand tu as ta sauce d'ADN, tu utilises un alcool (style éthanol) pour précipiter ton ADN (car l'éthanol est hydrophobe). Tu utilises ensuite des ions chargés positivement (NH3+,...) pour rapprocher les différentes molécules d'ADN (qui sont chargée - à cause de leurs phosphates) et ça permet le regroupement des ADN entre eux, ceux qui les rend visibles.  [...] En bref, il faut precipiter l'ADN avec de l'Acetate de Sodium et de l'Ethanol 70% par agitation puis centrifugation. Il faut eliminer tout l'ethanol puis nettoyer le culot avec de l'Ethanol 100%. Apres une nouvelle centrifugation, l'Ethanol est eliminé et le culot d'ADN seché puis remis en suspension dans un tampon.  [...]

Biochimie : Pourquoi a-t'on besoin d'éthanol pour extraire le fructose du citron?

Mon hypothèse est que la partie polaire de l'éthanol va venir se fixer à l'ADN et que sa partie apolaire va repousser les molécules d'eau..mais je souhaiterai confirmation.  [...] .Mais les électrolytes présents dans la solution vont maintenant pouvoir se lier aux groupements phosphates de l'ADN, ce qu'empêchait l'eau mais pas l'alcool, puisqu'il est moins polaire. Ainsi l'ADN est neutralisé et précipite dans l'éthanol.  [...]