• Forum - Voltage, Résolution, Bandes

[Biochimie] Paramètres western blot

Je fais beaucoup de western sur des proteines de 150 et 155Kda. J'utilise un gel 4-12% bis-tris precast (NuPage Novex bis-tris). Je migre dans du tampon MOPS (je te laisse regarder sur le site fournisseur la compo) et ca me donne une super resolution.  [...] L'important n'est pas le voltage pour séparer les deux bandes mais la distance de migration. Le voltage est surtout important pour la résolution des bandes. Je faisais arriver la bande de 60 kDa du marqueur de taille à 1 cm du bas du gel car j'avais une protéine à 60 kDa qui m'intéressait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Meilleure résolution pour gel d'agarose

On arrive enfin à ma question. comment je pourrai faire pour améliorer la discrimination de mes bandes sur mon gel J'ai testé de passer de 1% d'agarose à 0.8%, c'est un peu mieux mais pas mirobolant. Des idées Sachant que je fait migrer 5min à 70V puis 25/30min à 150V. Si je diminue le voltage, ça sera mieux.  [...] Une autre solution bateau, c'est augmenter la longueur de ton gel, puis faire migrer plus longtemps (jusqu'à ce que le marqueur de taille 1kb sorte du gel par exemple.). Le problème de cette méthode, c'est que tes bandes seront moins fine, donc plus difficile à découper/purifier.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

Voilà je voudrais savoir quel est le voltage adéquat pour séparer de protéines de 280 et 290 kDa, sachant que jusqu'à maintenant je n'ai pas pu le faire en utilisant des gel de 4-12% et 3-8% à 200V. Je sais qu'avec un SDS-PAGE la charge des protéines n'a pas de roles sur mobilité mais le voltage peut-il jouer un rôle sur la résolution de la séparation.  [...] plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...]

[Biologie Moléculaire] Migration SDS page en "sourire"

1) Voltage excessif. La chaleur perturbe la migration électrophorétique. Il faut particulièrement éviter les situations où le gel est soumis à des températures différentes. Les gels en plaque sont particulièrement sensible et il est fréquent que le centre des gels surchauffe si on est trop pressé.  [...] Cela cause une migration plus lente des échantillons des puits périphériques caractérisé par des bandes protéiques ayant migré plus rapidement au centre du gel, créant un patron ayant la forme d'un sourire... Pour assurer un refroidissement uniforme de tout le gel, diminuer le voltage et augmenter la durée de migration.  [...]

Potentiel d'action et ions potassium

A côté de cela il existe des canaux potassique non sensibles au voltage et qui la plupart du temps entrent en jeu dans des voies de signalisation cellulaire. En effet il existe de nombreux moyens d'activer des canaux potassiques par couplage avec d'autres récepteurs (Ach par exemple), d'autres sont sensibles à l'étirement, ac. gras, ATP,  [...] Mais bien sûr, moi aussi ça me laisse perplexe mais dans le cours, on a un graphique qui représente I(K+) en fonction du temps et la droite reste sur 0 d'ordonnée sauf au moment de la phase descendante... Mais ça doit être pour la conductance des canaux voltage-sensibles.  [...]

[Physiologie] Technique Voltage Clamp

Cell membranes of excitable cells contain many different kinds of ion channels, some of which are voltage-gated. The voltage clamp allows the membrane voltage to be manipulated independently of the ionic currents, allowing the current-voltage relationships of membrane channels to be studied.  [...] Mais je dirais que cela permet en mesurant le courant de voir ainsi quel type de courant (entrant, sortant, intensité) on a en fonction du voltage imposé, et donc de voir quel type de canaux on recrute, etc... étant donné que certains canaux sont voltage dépendants.  [...]

[Biologie Cellulaire] Canaux ioniques

On distingue en effet trois groupes de canaux ioniques selon la dépendance de leur activation (inotrope, mécanodépendant [étirement-dépendant] et tensiodépendant [voltage-dépendant]), mais cela n'exclut pas qu'il existe des canaux à la fois sensible à un ligand et à un étirement ou à un ligand et au voltage.  [...] S'il est vrai que la plupart des canaux voltage-dépendants sont exclusivement sensible aux variations de potentiel, ce n'est pas une règle universelle. d'une part, des ligands peuvent tout à fait venir se lier à des canaux voltage-dépendant et provoquer le plus une inhibition, d'autre part, il existe des canaux ioniques sensibles aux ligands et au voltage.  [...]

[Physiologie] Dépolarisation

Comme je l'ai dit, si tu veux qu'un potentiel d'action soit calcique (ou que des ions calcium participent à une dépolarisation), il faut qu'il y ait des canaux calciques voltage dépéndants sur ta membrane.  [...] 001% de la population de ions K + ). En sortant, les charges diminuent la voltage (par définition, le référentiel se situe à l'extérieur de la cellule). Puisque le voltage est négatif, un ion K + aura moins d'énergie à l'intérieur de la cellule que l'extérieur (E = charge*voltage) et sera donc poussé par le champ électrique vers l'intérieur de la cellule.  [...]

physiologie animale, loi d'ohm appliquée a un courant ionique

Grâce à un générateur qu'on adjoint au dispositif on impose une ddp (d'où le nom de voltage imposé). Puis grâce à un ampèremètre on mesure l'intensité du courant ionique induit par la ddp. Or courant et tension sont liés par une relation I = gU, et on sait que U est imposé, on peut donc en déduire g (la conductance) qui est directement liée à l'état d'ouverture du canal. On peut donc étudier son fonctionnement.  [...] Après, ça devient plus technique on parle de rectification sortante, entrante et de courbe courant/tension (on utilise l'intensité du courant qu'on obtient suite a la technique en fonction du voltage imposé) et le lien entre la courbe et la sélectivité.  [...]

Canaux de fuite/Canaux voltage dép

C'est à peu près ça. Je ne dirais pas le potentiel d'action personnellement car par exemple les canaux sodiques voltage-dépendants s'ouvrent dès que leur seuil est atteint, t'as par exemple des canaux à haut seuil et bas seuil d'activation donc qui ne s'activent pas au même voltage.  [...] Les canaux Na+ voltage-dépendants du potentiel d'action ne s'ouvrent pas à +20mV, c'est bien avant puisque pour arriver à +20mV il faut déjà que des charges positives soient entrées dans la cellule (le potentiel de repos du neurone étant environ -70mV), donc les canaux sodiques voltage-dépendants se sont ouverts avant 20mV.  [...]