• Forum - Vitesse, Migration, Séparation

[Biochimie] glycine

Dans le staking, la vitesse des ions glycinates est faible car le pH est à environ 6.8, ce qui est proche du pHi des ions glycinates. ils seront donc faiblement chargés et migreront lentement alors que les protéines et les ions chlorures migrent rapidement.  [...] Dans le gel de resolving, la vitesse de migration des ions glycinates augmente dans le gel de séparation, car le pH du gel de séparation est de 8.8, donc les protéines sont moins rapides que les ions porteurs. Les protéines se font dépasser par les ions glycinates et les différents complexes protéines-SDS se séparent grâce aux pores du gel.  [...]

[Biochimie] Modifications post traductionnelles et électrophorèse !

Non pas à ma connaissance. Pour mes protéines après migration à 80V dans le stacking et 130V dans le separating, je transfère en liquide pendant 1h30 à intensité fixe 350 mA, puis les autres étapes sont inchangées par rapport à d'autres westerns sur d'autres protéines.  [...] Oui mais ça reste toujours une question de taille et non de masse, la masse découlant de la taille de la protéine. Le critère permettant la séparation des protéines est la taille, plus exactement comme disent les biophysiciens le volume hydrodynamique de la protéine qui va déterminer sa vitesse de migration au travers des mailles du gel.  [...]

[Biochimie] electrophorese

Durant la gélification on aura pris soin de faire des puits où on déposera des échantillons. Chaque extrémité du gel sera mise en contact avec un tampon contenant des électrolytes qui, soumis dans à un potentiel électrique, permettra la propagation d'un courant dans le gel.   [...] Ce courant entraînera les molécules constituant l'échantillon. Cette migration permettra la séparation des diverses espèces moléculaires qui migreront à des vitesses différentes.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse capillaire

Le principe général consiste à injecter des micelles au coeur hydrophobes dans l'electrolyte de séparation. Si ton composé neutre ne réagit pas aux micelles il migrera à la vitesse du flux électroosmotique mais si en revanche il est totalement solubilisé par les micelles il migrera à leur vitesse électrophorétique.  [...] Ceci permet de discriminer réellement les vitesses de migration de tes molécules et d'obtenir une séparation digne de ce nom.  [...]

[Biochimie] électrophorèse SDS PAGE

Je travaille avec des protéines recombinantes. Avant j'avais des bandes extraordinaires et bien claires ms dernièrement la séparation ne se fait pas comme il faut et n'arrive pas au front de migration.  [...] Je fais la migration en volt fixé. Normalement je le fixe à 120V, parfois le courant reste fixé à 120v et le générateur affiche une tension de 50mA, dans ce cas j'obtiens de bons résultats et j'ai une très bonne séparation. Mais le problème qui se pose c'est que parfois le courant s'arrête à 60V et 70mA et dans ce cas j'obtiens une mauvaise séparation et la migration s'arrête au milieu du gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...] Second point. une migration trop rapide peut emmeler (désolé, j'ai perdu le bon mot) les protéines, comme l'a dit sebastien_cha au début du poste, donc si 150V ne fonctionne pas, pas de panique, diminue juste le voltage dans un premier temps.  [...]

[Biochimie] migration sds page

Mon problème ici est surtout que je cherche à faire une détection avec un anticorps anti-phosphotyrosine et j'ai donc besoin d'avoir une bonne migration/séparation.  [...] je viens de recommencer un gel en diminuant la concentration en glycérol, en prenant de nouveaux produits (acrylamide, tampons avec le bon pH, b-mercaptoéthanol...). La migration est un peu meilleur mais mes protéines ne dépassent toujours pas la moitié de mon gel de séparation alors que mes marqueurs et mon front de migration sont OK.  [...]

Migration SDS PAGE

Le problème viens de la migration (200Volt constant, ampérage se régule seul), qui est réalisée en tampon MES (50mM mES, 50mM Tris Base, 0.1% SDS et 1mM EDTA), la migration du gel se passe bien, la séparation du poids de marqueur moléculaire est jolie et bien distincte, mais après coloration au bleu de coomassie (1H sous agitation), et décoloration à l'eau tiède.  [...] Je suis ce protocole depuis toujours pour la migration des gels en tampon MOPS (protéine standard), et je n'ai aucun soucis. Le fait de passer en tampon MES (protéine de faible poids) me donne des gels illisibles.  [...]

clonage

Merci pour votre réponse mais pour moi la PCR c'est pour l'amplification et apres une migration sur gel agarose suffit pour la séparation.  [...] Svp, je veux juste savoir si le clonage pourrai être utilisé afin de séparer des gènes (mettre en evidence le gene cible des talen) et non pas que pour l'amplification ou pas.   [...]

[Biologie Cellulaire] Interêt d'une réduction et d'une alkylation pour un gel bidimensionnel

Dans le protocole du gel 2D, juste avant de lancer la migration de la deuxième dimension (séparation en fonction du poids moléculaire) deux étapes de réduction et d'alkylation sont necessaires.  [...] Ma question est simple. quel est l'intêret de ces opérations Est-ce pour rendre les protéines le plus neutre possible et les faire ainsi migrer seulement en fonction de leur poids.   [...]