• Forum - Vecteur, Résistance, Bactérie

[Biologie végétale] Transformation génétique du tabac par agrobacterium

En laboratoire nous avons réalisé une transformation génétique du tabac par le biais de la bactérie agrobactérium tumefaciens, pour ceux qui ne connaissent pas bien le principe, c'est simple. On a la bactérie qui contient un vecteur incluant entre autre un gène codant pour une résistance à un antibiotique ici la kanamycine.  [...] On va faire découper des petits carrés dans la feuille de tabac qu'on va mettre en contact avec la bactérie en question et puis on va la mettre en culture dans une boite de pétri avec un milieu MS104 (= MS + BAP (cytokinines) + NAA (auxine)) et l'antibiotique en question la kanamycine + de la carbenicilline (qui apparemment sert à tuer la bactérie, mais ça je ne suis pas très sûre) qui sert de milieu de sélection étant donné que si ça marche les cals qui se formeront résulteront des cellules végétales qui auront bien intégré le gène codant pour la résistance à la kanamycine.  [...]

[Biologie Moléculaire] cellules compétentes DH5a

Si ca se trouve vous avez une contamination de votre environnement (pipettes) avec un vecteur qui transforme vos bactéries à votre insu (de très petites quantités de plasmide suffisent à transformer).  [...] le vecteur possede un gene de resistance a l'ampicilline et apporte donc la resistance à l'ampicilline quand il transforme une bactérie DH5a. Or si la bacterie est deja resistante a l'ampicilline avant la transformation, tu ne peux pas distinguer les bactéries transformées des bacteries non transformées resistantes à l'ampicilline.  [...]

[Génétique] ADN: transcription, traduction et biotechnologie

Pour ton problème 4 après avoir inséré ton insert dans le vecteur ensuite tu fais une banque en transfectant ton vecteur dans les bactéries. Puisque les bactéries se multiplient échangent des info, tu ne sais pas quelles bactéries ont intégré ton vecteur avec ton insert et si ton insert est bien présent dans ton vecteur.  [...] Si ta bactérie a le vecteur mais sans l'insert, elle a pu se développer puisque dans l'insert elle a un gène de résistance à un antibiotique (ampicilline ou autre) donc du coup elle sera bleu puisqu'elle aura synthétisée la B-galactosidase. Et enfin si ta bactérie n'a pas l'insert elle n'a pas pu se développer.  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Oui, si ton plasmide n'a pas intégré l'insert, ta bactos va mourrir parce que dans le milieu de culture tu mets un antibiotique. Mais le vecteur que tu as inseré dans ta bactérie possède le gène de résistance à cet antibio ce qui permet de faire une première sélection antre bactos avec plasmide et bactos sans plasmide.  [...] Si elles commencent à dater, il se peut que les rendements soient effectivement faibles. De toutes façons, une bactérie fraichement transformée est toujours plus productive.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le plasmide a t'il l'insert?

Mais là j'ai un problème. la résistance à la streptomycine se trouve sur le vecteur et non sur l'insert. Donc dans ce cas nous sélectionnons simplement les bactéries qui ont un plasmide (avec ou sans insert).  [...] - sélectionner positivement sur streptomycine et négativement sur ampicilline (si j'ai bien compris, ton vecteur confère une résistance à la strept et si ton insert est là, les bactéries perdent leur résistance à l'ampicilline).  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Je n'ai pas vraiment compris comment on fabriquait un vecteur d'expression. Je m'embrouille avec ces histoires d'enzymes de restriction et de gènes codant pour la résistance à l'ampicilline, etc.  [...] Les gènes codant pour une resistance à l'ampicilline par exemple permettent de sélectionner les bactéries qui ont reçu le transgène. Mais pour ce qui est de l'amplification pour obtenir de grandes quantités de plasmide, c'est tout bête mais l'origine de réplication permet de répliquer le vecteur dans une même bactérie ou bien chez les cellules filles aprés mitose.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour ce qui est finalement du choix du vecteur, il te faut un vecteur contenant une origine de réplication procaryote, un gène de résistance à un antibiotique et pourquoi pas le gène beta-galactosidase à cheval du polylinker (cela permet de sélectionner les bactéries qui ont un plasmide ayant intégré un insert), et bien sûr le polylinker.  [...] par exemple. le pBR322 comprend 2 gènes de résistance l'un à l'ampicilline et l'autre à la tétracycline... celui de la tétracycline contient un site de restriction du BamHI.. ainsi après transformation bactérienne, les bactéries qui ont inclu le vecteur recombinant seront de phénotype Amp R et Tet S.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

dans les vecteur de plasmide en peut cloner un ADN étrange par insertion dans un gène de résistance à un antibiotique la question est quelle est la méthode pour identifier les bactéries qui ont incorporés les plasmides recombinés ou le plasmides intacte.  [...] Dans ce cas pour différencier ces bactéries de celles qui ont le plasmide recombinant avec ton insert, on fait ce que l'on appelle le test blanc-bleu. Dans ton plasmide tu as un gène de résistance, un gène lacz avec son promoteur et d'autre partie encore.  [...]

Problème sélection kanamycine

J'essaie de sous cloner un gène dans le vecteur pADTRACK-CMV, donc un plasmide avec deux ORF, mais surtout une résistance à la kanamycine. Malheureusement jusqu'à maintenant j'obtiens toujours des tapis complet de colonie absolument partout et surtout même dans mes controles ne contenant que des bactéries (non transformées.  [...] Ça parait étrange quand même que toutes tes bactéries soient devenues résistantes. A moins que tu les fasses tout le temps pousser sur des milieux enrichis en kanamycine, c'est le genre de mutation qui a tendance à disparaitre, étant plutôt contre productive pour la bactérie.  [...]

[Microbiologie] Symbiose

Il a été montré que l'infection de Culex quinquesfasciatus (vecteur naturelle du West Nile Virus) par Wolbachia (alpha protéobactérie) induit une forte résistance de Culex à l'infection au WNV. Cette symbiose est donc une piste de lute contre le WNV.  [...] Voila tout ceci pour vous dire que je cherche si il existe une symbiose du même type qui confère une résistance du vecteur (ou cellule,etc) à un parasite (ou tout autre organisme).  [...]