• Forum - Vecteur, Résistance, Antibiotique

[Biologie Cellulaire] A quoi sert le co-transfert avec un vecteur de résistance à un antibiotique

C'est pour faire un transformant stable exprimant ton gène d'intérêt. L'idée est de transfecter avec un vecteur codant pour une protéine de resistance à un antibio. Ce vecteur va s'intégrer (évenement très rare), et les transformants (ayant intégré le vecteur de manière stable) seront resistants à une sélection à l'antibiotique.  [...] Il arrive que le vecteur contenant l'ADNc (dans ton cas l'ADNc (pas ARNc, les vecteurs sont a ADN en majorité (sauf certains vecteurs viraux)) codant les recepteurs de ta cellule, sous le controle d'un promoteur fort, permettant une forte synthèse de l'ARNm correspondant) pour le gène d'intérêt ne comporte pas de gène de resistance à des antibio eucaryotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour ce qui est finalement du choix du vecteur, il te faut un vecteur contenant une origine de réplication procaryote, un gène de résistance à un antibiotique et pourquoi pas le gène beta-galactosidase à cheval du polylinker (cela permet de sélectionner les bactéries qui ont un plasmide ayant intégré un insert), et bien sûr le polylinker.  [...] J'ai moi aussi de la difficulté a trouver un vecteur approprié, Et Je ne comprend pas pourquoi le bon vecteur dans cet exemple serait PinPoint xa-1 Selon ce que j'ai vu il ne possede pas de sites de restriction communs avec la sequence d'ADNc dans sa region du gene de resistance Je ne comprend pas d'ailleurs pk le site de restriction doit se trouver dans la sequence de resistance a l'antibiotique et non ailleurs dans le plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protocole pour une ligature + tranformation ?

Tu transformes et tu sélectionnes avec l'antibiotique dont la résistance est conférée par ton nouveau vecteur. Du coup, si tous tes plasmides étaient linéarisés tu n'auras sélectionné que tes nouveaux plasmides recombinants. Sinon (le plus probable) il faudra faire un petit screen PCR pour les retrouver.  [...] En imaginant que ta perte est la meme lors de la purif entre le vecteur et l'insert, il te reste en theorie 3.2 ng d'insert... donc en pratique, rien du tout... jettes tout et recommence. Tu vas galerer pour cloner un truc que tu n'as meme plus.  [...]

clonage

Le clonage sert à placer une séquence d'intérêt dans un contexte génétique bien contrôlé, le vecteur. Je suppose que l'idée est de voir ce qu'il y a avant un traitement, ou une exposition aux protéines TALEN et après afin de caractériser la mutagénèse.  [...] sélection des clones ayant bien reçu le vecteur avec l'insert. grâce a un gène de résistance a un antibiotique et un gène rapporteur car le site d'insertion de l'insert est situé à l'intérieur du gène de la B-galactosidase.  [...]

[Biotechnologie] RNA interference : siRNA, shRNA

- Dans le cas des shRNA, la séquence codant pour le shRNA est contenu dans un vecteur, comment le vecteur est-il intégré dans l'animal A-t-on une insertion dans le génome (dans ce cas il serait possible de faire un genre de Knock-in), ou le plasmid reste-t-il simplement dans le nucleus, et exprime le shRNA (possibilité de passage à la cellule fille ).  [...] En culture cellulaire, si le vecteur est un plasmide, il ne s'intègre pas dans le génome mais peut se répliquer. Cependant il risque d'être expulser si il n'y as pas de pression de sélection comme une résistance à un antibiotique. Le moyen le plus sure de faire une lignée stable est d'utiliser un vecteur lentivirus, qui intègre la séquence du shRNA (ou de n'importe quel gène) dans le génome.  [...]

[bio mol] pUC et LacZ

Cette région est placée en amont du gène de lacZ (d'une partie seulement en fait, lacZalpha) de sorte que si le fragment à cloner a intégré le vecteur, il décale le cadre de lecture de ce peptide qui n'est plus synthétisé. donc en présence de X-gal, pas de coloration bleue (voir explication plus haut).  [...] Dans ce cas je ne comprends pas bien comment on va pouvoir effectuer une selection...Par ailleurs pourquoi utilise t-on la toxine diphtérique alors que l'on a déja un gène de résistance à un antibiotique pour la selection négative...enfin je ne saisis pas bien la difference entre vecteur cible et allèle cible.  [...]

[Génétique] ADN: transcription, traduction et biotechnologie

D'où le test blanc-bleu avec le gène LacZ (dans le vecteur) qui te permettras de cribler ta banque. Ton insert est inséré dans la séquence de LacZ du coup LacZ est non fonctionnelle et donc pas de synthèse de B-galactosidase et donc normalement en présence de X-gal + IPTG ta colonie est blanche.  [...] Si ta bactérie a le vecteur mais sans l'insert, elle a pu se développer puisque dans l'insert elle a un gène de résistance à un antibiotique (ampicilline ou autre) donc du coup elle sera bleu puisqu'elle aura synthétisée la B-galactosidase. Et enfin si ta bactérie n'a pas l'insert elle n'a pas pu se développer.  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

Oui, si ton plasmide n'a pas intégré l'insert, ta bactos va mourrir parce que dans le milieu de culture tu mets un antibiotique. Mais le vecteur que tu as inseré dans ta bactérie possède le gène de résistance à cet antibio ce qui permet de faire une première sélection antre bactos avec plasmide et bactos sans plasmide.  [...] Sinon le vecteur utilisé est Flag. En fait le truc, c'est qu'on sait pas pourquoi ca marche pas en fait... On va recommencer la semaine prochaine en faisant des prélévements à chaque étape et les chromatographier afin de voir à partir de quel moment notre ADN s'envole.  [...]

[Génétique] vecteur de plasmide

dans les vecteur de plasmide en peut cloner un ADN étrange par insertion dans un gène de résistance à un antibiotique la question est quelle est la méthode pour identifier les bactéries qui ont incorporés les plasmides recombinés ou le plasmides intacte.  [...] Quand tu insères ton ADN tu vas l'inséré au milieu du gène lacZ sous la dépendance de son promoteur. De ce fait en rajoutant du X-gal dans ton milieu (contenant un antibiotique correspondant au gène de résistance) au moment de l'ensemence tu obtiendra 2 types de colonies.  [...]

[Biochimie] Vecteur d'expression pour une proteine recombinante

Oui, il existe une multitude de vecteurs contenant un gène de résistance à un antibiotique. ampliciline, kanamycine, etc... Ca permet de ne laisser pousser que les clones qui ont incorporé ta construction.  [...] En conclusion, il n'y a pas besoin d'insérer le gene de résistance en même temps que ton gene d'intéret. Les vecteurs commerciaux ont tous un gene procurant une résistance antibiotique.  [...]