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Créer une protéine taguée NLS

J'ai ma séquence codant ma protéine dans un vecteur A. je suis capable de la sortir.  [...] Quelqu'un connait-il un vecteur avec un tag NLS dans lequel je pourrai rentrer la séquence codant ma protéine Puis-je acheter directement le TAG.  [...]

[Immunologie] Fixation pour immonofluorescence

Je sais que la GFP est compatible avec la fixation des cellules, mais cela dépend peut-être de la protéine à laquelle elle est taggée. D'autre part, ici tu utilises des formes modifiées de la GFP, as-tu regardé dans des publications si de l'observation de fluorescence sur cellule fixées a été réalisé avec ces marqueurs fluorescents.  [...] Le plasmide vide signifie qu'il n'y a que la GFP. Donc la GFP est exprimée seule, pas en fusion avec la protéine d'intérêt. Cela fournit un contrôle indispensable pour montrer que les conditions utilisées n'affecte pas la localisation de la GFP, et donc prouver qu'une relocalisation éventuelle de la protéine de fusion GFP-X est spécifique de la protéine X.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

j'essaye de resoudre un petit probleme dans lequel j'ai un ARNm qui code pour une proteine. Je dois choisir un vecteur pour pouvoir reproduire cette proteine dans une bacterie.  [...] On trouve derrière la cassette de clonage pour insérer votre protéine d'intérêt. C'est donc un vecteur de choix pour la production (il porte un promoteur de transcription) et la purification (un tag excisable) des protéines.  [...]

[Biologie Moléculaire] rrnB plasmide pMALc2x

Petite question de biologie moléculaire, j'ai ajouté mon gène d'intérêt dans le vecteur pMALc2x afin de produire ma protéine avec le tag MBP. Le promoteur est le promoteur tac inducible par IPTG pas de problème, mais à quoi correspondent les régions rrnB ce serait des terminateurs, mais pourquoi je ne les ai jamais vu sur les autres vecteurs d'expression type pET par exemple et surtout qu'est ce que cela apporte de plus, pourquoi avoir choisit un terminateur qui se compose de 2 régions.  [...]

[Biologie Moléculaire] Urgent Clonage

C'est pas détaillé mais il manque encore des infos. nature/taille de l'insert y a-t-il des sites de restriction pour le sortir de l'ancien vecteur faut-il cloner en phase avec quelque chose (Tag, protéine de fusion).  [...] La protéine que je veux exprimer doit avoir une GFP et un tag His, ces deux là sont déjà dans le nouveau plasmide, mai puisque je dois synthetiser mes amorces avec un codon stop, comment ces tags peuvent-ils etre lus.  [...]

Traduction de termes anglais issus d'un article.

Pour FLAG c'est aussi ce que j'aurais dit à la base, mais dans l'article avec un petit Ctrl+F toutes les apparitions de FLAG se font quand ils nomment le vecteur (pCMV-FLAG), je l'ai pas retrouvé en dehors du vecteur, pour designer la protéine, donc pas sur que dans le contexte ca soit ca, si (pas lu l'article en entier).  [...] si c'est ca. En fait il existe des vecteurs ou le tag (flag, 6his, myc, ou autre) est déjà là, en amont ou aval du site de clonage, du coup en intégrant ton cDNA en phase dans ce vecteur tu peux directement produire une protéine de fusion. Pratique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Système d'expression de prot invitro (cell free)

Je dois produire une protéine grande environ 160 kDa avec un système de production transcription / traduction provenant de mais, homme, lapin et bactérie. Me protéine est une protéine de levure.Voilà ce que je pensais faire.  [...] 1/ construire deux vecteurs (la protéine a un compagnon accroché), avec des Tag GST (dans la littérature ils préfèrent ce type tag).  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine étiquetée

C'est une protéine où on va lui coller une séquence Tag (exemple, l'histidine) et ça permet de savoir quel dose de protéines exogènes tu utilise dans ta culture cellulaire.  [...] Le tag est une séquence d'acides aminés rajoutés en amont ou en aval de ta protéine et permet de la visualiser (tags fluos) ou de la purifier (his tag, gst tag...).  [...]

[Biochimie] Tag His en N Ter???

J'utilisais jusque là le vecteur pET-21a et me suis rendue compte que le tag se trouvait en C ter. Malheureusement, la structure 3D de ma protéine fait qu'il se retrouve ensuite à l'intérieur et n'est donc pas accessible pour la purification sur colonne de nickel.  [...] Existe-t-il des plasmides permettant d'avoir une protéine taguée en N-Ter. Sachant que j'utilise l'IPTG pour exprimer et produire ma protéine dans des bactéries E.Coli. J'ai donc besoin d'un opéron lactose (lac).  [...]

[Biochimie] Séquence Kozak

Je compte insérer une séquence tag (3xFlag) devant la séquence codant pour une protéine qui débute par accatg... donc une séquence Kozak avant l'atg.  [...] Je vais donc en mettre une aussi devant la séquence codant pour le tag.Ma question. est-ce qu'il faut supprimer la séquence Kozak devant l'atg de la protéine pour ne plus avoir que celui en tête du tag ou cela n'a-t-il pas d'importance.  [...]