• Forum - Vecteur, Molécule, ADN

[Génétique] ADN recombinant transporté in vivo ou ex vivo dans contenu ?

En terme de génie génétique en thérapie par exemple pour faire rentré un ADN recombinant dans une cellule hote on parle souvent de vecteur je sais qu'un vecteur c'est une molécule d'adn doué d'autoréplication mais on dit également vecteur pour les virus, liposome etc.  [...] pas forcément. On peut par exemple faire rentrer de l'ADN (ou ARN) linéaire ou circulaire dans des cellules eucaryotes ou procaryotes en utilisant un choc electrique, et rien d'autre. Pas de vecteur dans ce cas la (enfin, ça dépend de la définition).  [...]

transgenese

Le vecteur est une molécule d'ADN auto-réplicable dans laquelle on insère, on clone, un fragment d'ADN provenant d'une autre source (bactérie, virus, eucaryotes,……etc.).  [...] L'ADN est une molécule chargée négativement, d'où l'idée de la complexer avec des molécules chargées positivement (lipides ou autres polymères) par des interactions électrostatiques.  [...]

PCR et vecteur de clonage

Les vecteurs de clonage permettent d'obtenir un vecteur (plasmide, phagemide, cosmide etc...) quand on parle d'amplification de l'ADN, c'est alors que tu as une molécule qui va se répliquer dans la bacterie (comme les chromosomes) ceci va permettre d'obtenir un grand nombre de copie du plasmide.  [...] Non quand tu amplifies un vecteur par transfo, tu ne le fait qu'a partir d'une molécule que tu sais etre la bonne (ou que tu verifies a posteriori).  [...]

[Biotechnologie] proteine recombinante d'interet médical

ensuite introduire la molécule d'ADN (vecteur + gène d'intérêt) dans une cellule hôte, qui exécute les instructions qui lui sont fournies par le gène d'intérêt, et réalise les modifications post-traductionnelles (les 3 ponts disulfures et la glycocylation à 15 %) dans l'objectif de fabriquer la protéine recherchée. L'hôte sera donc par exemple des cellules CHO.  [...] la protéine sera enfin récupérée puis purifiée (séparation, extraction, purification d'ou l interet de connaitre sa masse moleculaire face à des marqueurs de poids).  [...]

[Biochimie] Question sur la biotechnologie

à lire. Biologie moléculaire de la cellule par Lodish et al. ou Alberts et al. (ya des chapitres sur le génie génétique qui traitent des banques d'ADN).  [...] En bio moléculaire, on parle de clones souvent pour parler de gènes. En gros on a un gène lambda, on l'insère dans un vecteur (grosso modo un ADN avec des gènes de machinerie d'expression ) et ensuite on insère ledit vecteur dans une bactérie pour faire multiplier le gène, par les divisions cellulaires successives, les cellules bactériennes issues de la même cellule mère étant sur le papier, identiques.  [...]

transgenèse

Ben j'ai répondu pourtant. C'est un vecteur, donc un système porteur d'une séquence d'adn destinée à être transférée dans un autre organisme. Mais ce même vecteur peut-être utilisé pour le clonage, c'est-à-dire qu'il est capable de se répliquer dans une bactérie E.  [...] Oui. Par ex., le plasmide Ti d'Agrobacterium tumefaciens est utilisé comme vecteur mais avant il doit être désarmé, on lui retire sa région vir pour lui oter son pouvoir pathogène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

Pouvez vous m'expliquer simplement la façon dont on crée une ribosonde Je ne comprends pas en effet ce que contient le vecteur au départ (de l'ARN ou de l'ADN), pourquoi on l'appelle ribosonde et pas sonde tout court. D'ailleurs, c'est de l'ARN la ribosonde Bref, merci beaucoup d'avance.  [...] - La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...]

[Biotechnologie] ADN recombinant réplication dépend du cycle cellulaire ?

Le plasmide (vecteur) qui fait partie de l'ADN recombinant sera injecté dans le cytoplasme d'une bactérie comme e.coli et donc la réplication de l'ADN recombinant sera dépendant du cycle cellulaire ou non.  [...] En fait l' ADN recombinant qui est composé de plasmide qui est le vecteur et de l'ADN inséré ainsi que d'autre gène inséré dans ce vecteur comme le gène de résistance à l'ampicilline le gène marqueur lactZ qui code pour la protéine béta galactosidase et le polylinker qui s'insère dans le gène marqueur lactZ sans influencé son fonctionnement, bref en gros lors de l'injection de l'ADN recombinant dans les cellules hote comme e.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Transfecter un ADNc dans une cellule n'a d'interêt que s'il est équipé d'un promoteur qui permettra d'initier sa re transcription en ARNm, ce qui est rare (si tant est que ça existe).   [...] La diffusion passive d'ADN dans une cellule (sans système de vectorisation) est un processus très peu efficace. On peut le transfecter par des moyens autres qu'avec un vecteur de type lipide cationique (electroporation ou criblage par exemple), mais d'un point de vue technique, un système de vectorisation est indispensable pour transfecter de l'ADN de manière rapide et efficace.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Ainsi, en ajoutant de l'ampicilline au milieu, seules celles avec un vecteur survivent. Vous sélectionnez les bactéries transformées, pas nécessairement celles qui contiennent votre fragment d'ADN d'intérêt.  [...] Ce sont les mêmes. Si vous souhaitez cloner dans le site BamHI d'un vecteur et que votre fragment d'ADN ne porte pas de site BamHI, vous allez créer des amorces PCR contenant NNNNNN-BamHI-extrémité5'dufragment et NNNNNN-BamHI-extrémité3'dufragment (antisens) Votre fragment amplifié sera NNNNNN-BamHI-fragment-BamHI-NNNNNN et vous pourrez générer votre fragment avec des extrémités BamHI libres qui pourront liguer avec celles de votre vecteur.  [...]