• Forum - Vecteur, Expression, Intérêt

Technique Gateway

J'ai vu la technique de clonage par Gateway, mais ce n'est pas clair du tout. Je ne vois pas l'intêret du passage d'un vecteur donneur, à un vecteur d'entrée, à un vecteur de destination et enfin d'expression.  [...] je pense que l'interet du vecteur donneur (qui devient vecteur d entrée après avoir récupéré le gène) est qu'il a tout les gènes permettant l'infection lambda et les gènes accompagnateurs de la recombinaison. Et le vecteur de destination (qui devient d'expression) a les gènes permettant la suexpression du gène d'intéret (promoteur inductible ou costitutif,...).  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur de clonage et le vecteur d'expression

svp quelle est la difference entre le vecteur de clonage et le vecteur d'expression à part que l'un a un promoteur et pas l'autre.  [...] Un vecteur d'expression est un vecteur dans lequel on va cloner le même fragment d'ADN après vérification du clonage dans le vecteur de clonage (taille de l'insert, séquence...) et grâce à son promoteur (constitutif ou inductible) ce vecteur va diriger la bactérie hôte d'expression pour produire la protéine d'intérêt.  [...]

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

CA peut être plus ou moins similaire, a part que le vecteur de clonage est fait pour être réplicable en bactéries (comme une sorte de vecteur navette ou on insère ce que l'on veut pour l'amplifier, c'est a dire qu'il contient des origines de réplication, des sites de clonages, etc), tandis que le vecteur d'expression est lui équipé des éléments nécessaires a l'expression de ta séquence, que ce soit expression procaryote ou eucaryote.  [...] donc si j'ai bien compris, le vecteur de clonage s'utilise in vitro alors que le vecteur d'expression est inséré dans une bactérie pour exprimer le gène d'intérêt.  [...]

vecteur d'expression

Bonjour à tous, soit une cellule hote transformée. Tant qu'elle n'a pas reçu de vecteur d'expression elle ne pourra pas commencer la transcription du gène d'interet.  [...] Le vecteur d'expression est en général un plasmide circulaire contenant le gène d'intérêt accompagné de tous les éléments nécessaires à sa transcription, une ou plusieurs origines de réplication et un marqueur de sélection (gène de résistance ou autre).  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Ils disent ensuite que le produit de PCR () est purifié par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite il est encore inséré dans un autre vecteur entry vector en utilisant une deuxième PCR(). Puis ils utilisent enfin un vecteur d'expression pour obtenir la protéine de fusion GST-gene d'intérêt.  [...] C'est assez simple en fait. Le gene d'interet etait deja present sur un plasmide mais qui ne leur convenait pas. Ils ont donc amplifié le gene par PCR, on purifier le produit d'amplification sur gel pour se debarasser du plasmid ayant servi de matrice, pour cloner le tout dans un plasmide permettant l'expression de la protéine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

Pour l'intérêt de tes 2 plasmides. générallement, ton second vecteur est un vecteur d'expression et non le premier vecteur...le premier vecteur te permet par exemple de séquencer le gène introduit...même si par précaution certains séquencent aussi après insertion dans le second vecteur (comme dit avant, les deux séquences sont censées être identique car pas de polymérase intervenant, il y a uniquement une recombinaison...).  [...] ça revient au même qu'avec les enzymes pour l'insertion dans ton second vecteur sauf que là encore, tu n'a pas besoin de rédigérer ton fragment à partir de ton premier plasmide pour le mettre dans un plasmide d'expression. Ici, avec le système gateway, ton plasmide d'entré va directement servir à la recombinaison avec ton second plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] pCMX vecteur

C'est le problème de la sous-traitance. Certains sous-traite leur travail (le clonage en particulier) et ne demandent pas les caractéristiques du plasmide du moment ou ils possèdent leur gène d'intéret dans un vecteur d'expression.  [...] Tu n'as qu'a digérer avec ces enzymes et mettre ton insert à la place en bidouillant un peu. Pourquoi te faut il toute la séquence Le bout de séquence qui pourrait être intéressant, le polylinker, est noté en bas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Ensuite, quand on parle de trangénèse additive en fait on injecte une multitude de vecteurs dans une cellule Puis ceux-ci vont s'insérer dans le génome ou rester tels quels Et je crois que je n'ai pas compris comment se faisait une trangénèse homologue.  [...] Mais avant tout le rôle du vecteur d'expression est d'amener le gène d'interet a l'intérieur de la cellule hote.  [...]

transgénèse maison

en cours d'SVT, on a étudié la transgénèse d'un gène de fluorescence de méduse vers des bactéries pour les rendre fluo aussi. et je me suis donc demandé si on pouvait effectuer une transgénèse sans matériel sofistiqué (je pense surtout à l'étape de l'extraction du gène) pour, par exemple, créer une plante fluo que l'on pourait faire pousser dans son jardin, ce serait trop classe quand même.   [...] Faire de la transgenèse sans matériel compliqué c'est pas bien possible, il faut déjà que tu amplifies ton gène d'intérêt (par technique de PCR, avec un appareil qui est pas donné) et qu'ensuite tu construises ton vecteur de transmission et d'expression.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs d'expression

Je voudrais savoir quel est l'intérêt de cloner des fragments d'ADN dans une orientation inverse de celle des promoteurs présents ou dans la même orientation Je ne sais pas si c'est très clair.  [...] D'après ce que j'ai compris de ton propos, l'ADN cloné en orientation inverse serait un contrôle négatif, car le vecteur correspondant ne permettrait pas l'expression de la protéine d'intérêt (en faisant que l'hypothèse que ton fragment d'ADN initial contienne une phase ouverte de lecture, un codon stop, etc.  [...]