• Forum - Vecteur, Clonage, Région, Expression, Promoteur

[Biologie Moléculaire] renseignement

pour une bactérie le promoteur se situe dans les régions -35 et -10.  [...] il faut donc prendre que la partie au niveau du codon start (ATG) jusqu'au codon stop, et donc on insère cette partie soit dans un vecteur de clonage pour cloner la région ou dans un vecteur d'expression juste après le promoteur du vecteur pour exprimer le gène.  [...]

[Biologie Cellulaire] Plasmide eucaryote/bactérien dans une lignée cellulaire

Tous les promoteurs eucaryotes ne sont pas identiques certains fonctionne chez d'autres espèces (en général ce sont des gènes issus d'organismes pathogènes) mais selon mon expérience la plupart du temps ça ne marche pas. C'est pourquoi on utilise des plasmide dit d'expression qui ont un promoteur et un terminateur plus ou moins fort en fonction de ce que tu veux faire voir même inductible, provenant en général de l'organisme hôte.  [...] Sinon c'est un gène humain, je sais que le promoteur naturel est assez fort mais quand je transforme une lignée cellulaire avec un plasmide bactérien (donc sans origine de réplication eucaryote) contenant ce gène je n'observe aucune expression. Je cherche donc a savoir si le problème vient du vecteur bactérien ou non avant de me lancer dans le clonage du gène dans un vecteur eucaryote.  [...]

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

Egalement (je demande beaucoup aujourd'hui et je le sais), si un professeur pourrait m'envoyer des exercices sur la reconnaissance de ces plasmides, ainsi sur ce qui est PCR, surproduction de protéine dans un système hétérologue afin que je puisse m'exercer.   [...] POur ta question sur les plasmides, la seule difference entre un plasmide de clonage et un plasmide d'expression, est que le second possede un promoteur permettant l'expression du gene.  [...]

La microdystrophine est-elle une protéine naturelle ?

2) Peut-on faire de la thérapie génique en apportant le gène de l'utrophine J'ai pensé que non car l'utrophine est déjà naturellement exprimée et il faudrait une approche pharmacologique pour augmenter son expression. Mais en fait la thérapie génique ne pourrait pas apporter d'autres gènes d'utrophine ailleurs dans le génome (sur d'autres chromosomes par exemple) et donc augmenter également le taux d'utrophine.  [...] Pour le 2 on peut tout a fait augmenter son expression avec un vecteur. Le choix du promoteur est important. pour la tissu-spécificité mais aussi pour le niveau d'expression.  [...]

[Biotechnologie] Composants d'un vecteur d'expression eucaryote

Merci mais je sais comment ça fonctionne. C'est un vecteur d'expression donc pourquoi vouloir un promoteur et pas de site polyA.  [...] Et sinon, on peut parfois trouver un intron dans certains vecteurs d'expression (entre le promoteur et le gène), je crois que ça augmente la capacité d'expression. Mais je ne crois pas que ce soit nécessaire.  [...]

Technique Gateway

J'ai vu la technique de clonage par Gateway, mais ce n'est pas clair du tout. Je ne vois pas l'intêret du passage d'un vecteur donneur, à un vecteur d'entrée, à un vecteur de destination et enfin d'expression.  [...] je pense que l'interet du vecteur donneur (qui devient vecteur d entrée après avoir récupéré le gène) est qu'il a tout les gènes permettant l'infection lambda et les gènes accompagnateurs de la recombinaison. Et le vecteur de destination (qui devient d'expression) a les gènes permettant la suexpression du gène d'intéret (promoteur inductible ou costitutif,...).  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

La PCR va permettre d'isoler et amplifier un fragment d'intérêt qui va ensuite être intégré dans un vecteur. Lorsqu'on fait un clonage ou un sous-clonage, on souhaite exprimer ce fragment qui dans la plupart des cas correspond à l'ADNc codant une protéine ou une partie de la protéine.  [...] Il faut donc un promoteur en amont du fragment pour qu'il soit transcrit, il faut des séquences d'initiation de la transcription pour l'expression chez une bactérie, une séquence ori qui permet la réplication du vecteur et de son insert. Tout ceci se trouve dans un vecteur et est indispensable à l'utilisation du fragment isolé.  [...]

[Génétique] Qu'est-ce qu'un clone provenant d'un YAC?

En fait on dit. les chercheurs ont décidés d'établir la carte physique de la région chromosomique impliquée dans un syndrome (peut importe le syndrome). Une banque génomique humaine construite à l'aide de YACs (chromosome artificiels de levure avec des inserts) a été criblée avec des marqueurs génétiques ordonnés de la région chromosomique concernée (marqueur 1 à 10).  [...] Oui exactement, les Yacs fournissent une alternative aux systèmes bactériens pour le clonage ou l'expression de gènes eucaryotes. Ils peuvent véhiculer de grands gènes eucaryotes, avec promoteur(s) et séquences de contrôle, et conviennent donc pour étudier les fonctions des gènes.  [...]

[Biotechnologie] Insuline

J'ai choisi comme système d'expression Pichia pastoris, mais j'ai crée le vecteur recombinant dans E.coli.  [...] Il va falloir que tu utilises un vecteur possédant un gène de sélection (HIS4 par exemple), une origine de réplication et un promoteur fort (généralement celui de l'alcool oxydase AOX1) compatibles avec pastoris. Invitrogen propose des plasmides pour l'expression chez pastoris mais je n'en sais pas plus.  [...]

Expression

On sait tous qu'un phénotype est la résultante de l'expression d'un ou de plusieurs gènes se trouvant sur un locus déterminer, ce qui m'intrigue c'est comment un gène peut s'exprimé Je ne parle pas des lois de la dominance et la codominance et autres, mais je voudrais savoir quelle est cette force qui dit à un gène toi tu t'exprime et toi non Vous trouverai sa peut être drôle, mais j'ai entendu parlé d'une énergie (intelligente) qui voyage en montant et en descendant le long d'un gène et c'est elle qui donne l'ordre au gène de s'exprimé, même si on suppose que c'est véridique, d'où cette énergie rassoit ces commandements Même si elle est intelligente, elle doit obéir à une loi.  [...] Un gène s'exprime s'il est transcrit en ARNm (puis traduit si le gène code une protéine). Donc l'expression d'un gène est régulée par les facteurs de transcription qui se fixent sur une région en amont du gène proprement dit, que l'on appelle le promoteur.  [...]