• Forum - Vecteur, Clonage, Promoteurs

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Normalement on linéarise un plasmide pour pouvoir mettre un terme à la transcription in vitro. Si on ne linéarise pas, la polymérase transcrit et ne s'arrête pas. Je trouve ça étonnant de linéariser pour aider la polymérase à transcrire. Un vecteur de clonage est constitué de deux promoteurs, un qui sera en amont de notre gène (ADNc) et l'autre en aval.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

Ces phages ont des ARN polymérases très efficaces et des promoteurs très simples et petits. Ils vont permettre de fabriquer in vitro de l'ARN.  [...] Un plasmide vecteur de clonage créé artificiellement peut avoir autour de son MCS (Multiple Cloning Site) deux promoteurs différents (phages T7 et SP6), ce qui peut donner lieu à deux ARN (un sens et un antisens), selon que le démarrage de la transcription se fasse à un promoteur ou à l'autre.  [...]

ADN ARNm

Dans ce cas-là, il y a des petites choses qui m'échappent. Le clonage de banques génomique utilise des vecteurs armés de promoteurs viraux, ayant un insert eucaryote, le tout intégré dans une cellule procaryote. Je trouve que c'est un bon exemple d'universalité.  [...] Si le code génétique n'es pas universel, le clonage génomique n'est pas possible. A moins que comme vous dites, ce n'est pas à généraliser et dans ce cas là, on utilise uniquement des bactéries qui ont une correspondance de code. Mais ça me parait vraiment vraiment bizarre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

En suite on trouve les choses pertinentes pour votre travail. Deux cassettes de clonages qui entourent le gène de la luciférase + polyA cs. L'idée de ce vecteur est de cloner des promoteurs ou des séquences régulatrices pour tester dans quel mesure des facteurs cis et trans activateurs peuvent activer la transcription de la luciférase.  [...] On trouve derrière la cassette de clonage pour insérer votre protéine d'intérêt. C'est donc un vecteur de choix pour la production (il porte un promoteur de transcription) et la purification (un tag excisable) des protéines.  [...]

Protéine recombinante, promoteurs du vecteur d'expression

Protéine recombinante, promoteurs du vecteur d'expression.  [...] 2/ On choisit un promoteur inductible. Si j'ai bien compris son interet est de pouvoir réguler la synthèse de la protéine en fonction de l'activité de la bactérie. Par exemple si la protéine synthétisé est toxique pour la bactérie on va chercher à ne pas la produire lors de la phase de multiplication bactérienne et lancer la production lors de la phase stationnaire.  [...]

transgenese

Le vecteur est une molécule d'ADN auto-réplicable dans laquelle on insère, on clone, un fragment d'ADN provenant d'une autre source (bactérie, virus, eucaryotes,……etc.).  [...] C'est aussi le vecteur qui, par sa propre construction (exemple, présence de promoteurs forts), pourra assurer ou contrôler l'expression des gènes clonés (vecteurs d'expression).  [...]

vecteurs

bonjour,quelqu'un pourriat il m'indiquer la différence entre un vecteur d'expression et un vecteur de clonage merci beaucoup.  [...] Un vecteur d'expression a pour but d'exprimer le gene clone, il possede donc en plus un ou des promoteurs inductibles ou non.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pourquoi mon vecteur a 2 promoteurs?

Pourquoi y a-t-il 2 promoteurs soient T7 et TAC et pas seulement 1 des deux Et à quoi sert ce Polymérase T7, qu'est ce qu'il a de spécial.  [...] Il s'agit du promoteur de la polymérase que tu vas synthéthiser. Apparemment c'est une région primordiale pour la transcription de la suite de ton vecteur, puisque cette polymérase est très spécifique et très rapide. Elle résiste aussi à la rifampicine, permettant de n'amplifier que ton gène d'intérêt, puisque les autres polymérases seront neutralisées.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation d'un promoteur spécifique

Donc voilà j'aurai voulu savoir s'il est possible de créer un vecteur d'expression pour un gène (ou un si RNA) sous le controle spécifique d'un promoteur d'un autre gène ou si on peut d'une facon ou d'une autre faire en sorte qu'un vecteur ne s'exprime que dans des cellules bien particulières.  [...] Bien sûr, mais il faut que tu sois sûr de ton promoteur, que tu construises ton vecteur avec l'ensemble du promoteur en question. or les promoteurs sont parfois énorme chez les eucaryotes, et que tes cellules possèdent tout ce qu'il faut pour que ce promoteur soit actif.  [...]

[Journal club] Reponse strigente et regulation globale de l'expression

Chez les bacteries une seule ARN polymerase (ARNP) est responsable de la synthese de tous les ARN. En croissance rapide, environ 95% des ARNP sont engagees dans la transcription des genes controles par des promoteurs forts dits stringents (ARN stables, facteur sigma majeur, etc.  [...] La ou le modele devient tres interessant, c'est que les auteurs proposent qu'en croissance rapide, l'ARNP etant a 95% engagee dans les promoteurs stringents, cette derniere est inaccessible pour un autre travail. En revanche, lors d'une reponse stringente, l'ARNP est liberee des promoteurs stringents et peut donc etre redistribuee entre les differents facteurs sigma et les activateurs en tout genre.  [...]