• Forum - Vecteur, Bactérie, Cellules

[Biotechnologie] Concrètement c'est quoi une banque d'ADN

L'utilisation du vecteur Bac (bacterial artifical chromosome) qui permet d'integrer un graaand bout de génôme. Son petit truc en plus Elle possède le gène par permettant la bonne division de la bacterie dans deux cellules filles.  [...] Sachant que ce vecteur se divise en même temps que la cellule, la quantité de plasmide dans une cellule est donc trèèès faible ce qui évite toute recombinaison de plasmide entre eux.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d’expression dans une bactérie

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression dans une bactérie.  [...] -Je voudrai savoir si lorsque l'on introduit un vecteur contenant l'adnc d'une protéine eucaryote dans une bactérie on est obligé de mettre une queux poly T sachant que les Arn procaryote non pas de queux poly A.  [...]

[Biochimie] PCR le but?

-l'insérer dans un vecteur pour par exemple l'insérer dans une bactérie, une cellule.  [...] Ca peut permettre par exemple de savoir si ta plante est un OGM ou pas, si tu as une infection par une bactérie ou un champignon, tu peux identifier rapidement le germe responsable.  [...]

[Génétique] Conséquence de l'intégration d'un vecteur dans une bactérie

C'est aussi pour ça qu'une souche résistante perdra son plasmide si on la fait pousser sur un milieu non sélectif. Les bactéries qui ne multiplient pas le plasmide pousseront plus vite que les bactéries l'ayant perdu accidentellement, et au bout d'un moment il n'y a plus que celles qui se multiplient le plus activement.  [...] Quand la bactérie se divise, un nombre aléatoire de plasmides va dans chaque cellule fille. Ensuite la bactérie re-multiplie les plasmides en même temps que son propre génome avant de se re-diviser.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide génie génétique

Un plasmide artificiel (vecteur) porte un ou plusieurs gènes de résistances pour sélectionner des cellules qui dans lequel ce plasmide est introduit. Le gène lacZ permet soit d'identifier facilement les cellules portant un vecteur avec un insert de celles dont le vecteur est vide (criblage bleu/blanc comme pour le vecteur pUC18).  [...] Les gènes de résistance permettent de sélectionner les bactéries qui ont intégré le plasmide, sur milieu sélectif (c'est à dire milieu nutritif + antibiotique le plus souvent).  [...]

Bio. Moléculaire: Transformation de E.coli avec opéron lux

Ensuite, j'envoie le mélange de cellules et de vecteurs dans un bain thermique à 42oC pour 90 secondes, précisément. Ensuite, je met directement sur glace. J'ajoute du milieu de culture LB et j'incube le tout à 37oC pour 60 minutes. Je me demandais en quoi cette incubation était nécessaire.  [...] .. Est-ce que la croissance des bactéries transformées commence pendant cette incubation Ou est ce que le vecteur pénètre dans la bactérie pendant cette période.  [...]

[Biotechnologie] Fabrication d'une protéine d'intérêt ?

- des gènes de résistance à l'ampicilline ou autre antibiotiques e tdes gènes de beta-galactosidase sont utilisées pour savoir si le gène est bien inséré (synthèse de la beta-gal) et pour pouvoir sélectionner les cellules qui vont synthétiser cette protéine (ça sert à rien de garder les cellules qui ne synthétisent pas la protéine en question).  [...] Ensuite vous faites votre transfection de bactéries ou de cellules eucaryotes. A noter que pour les cellules eucaryotes il existe deux types de transfection, stable (le vecteur s'insère dans le génome de la cellule) ou transitoire (le vecteur reste séparé du génome et finira par être éliminé).  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Tu as 2 transformations distinctes en fait. Une première, avec les bactéries, qui te sert à amplifier le plasmide et réaliser la mutagenèse dirigée. Ensuite, tu récupère ton bluescript et tu transfert dans le vecteur POZ. Ensuite, tu transformes des cellules eucaryotes avec le vecteur POZ.  [...] donc ce que j'ai compris, c'est qu'on peu récupérer les vecteur bluescript de nos bactéries transformées, les purifier puis les transférer sur des POZ es que c'est ca.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur recombinant

Alors voila j'ai un petit soucis avec les vecteurs recombinants au niveau de la détection des bacteries transformées par exemple.  [...] je voulais savoir comment on détecte les bacteries transformées de celle qui ne le sont pas aprés insertion du vecteur associé a l'ADN recombinant dans une bacterie.  [...]

[Biologie Moléculaire] cellules compétentes DH5a

en vu de clonner un fragment de gene, jai commencé par préparer des cellules compétentes DH5a, par traitement avec la glace. 20min dans la glace suivies par des lavages avec le glycerol. Aprés la transformation par électroporation, j'ai trouvé des colonies sur la boite LB+Amp de controle négatif( cellules DH5a sans vecteur) sur les autres boites LB+ Amp+ IPTG+ X-Gal j'ai trouver des colonies blanches et des colonies bleu.  [...] le vecteur possede un gene de resistance a l'ampicilline et apporte donc la resistance à l'ampicilline quand il transforme une bactérie DH5a. Or si la bacterie est deja resistante a l'ampicilline avant la transformation, tu ne peux pas distinguer les bactéries transformées des bacteries non transformées resistantes à l'ampicilline.  [...]