• Forum - Vecteur, ADN, Plasmide

[Biotechnologie] ADN recombinant réplication dépend du cycle cellulaire ?

Le plasmide (vecteur) qui fait partie de l'ADN recombinant sera injecté dans le cytoplasme d'une bactérie comme e.coli et donc la réplication de l'ADN recombinant sera dépendant du cycle cellulaire ou non.  [...] En fait l' ADN recombinant qui est composé de plasmide qui est le vecteur et de l'ADN inséré ainsi que d'autre gène inséré dans ce vecteur comme le gène de résistance à l'ampicilline le gène marqueur lactZ qui code pour la protéine béta galactosidase et le polylinker qui s'insère dans le gène marqueur lactZ sans influencé son fonctionnement, bref en gros lors de l'injection de l'ADN recombinant dans les cellules hote comme e.  [...]

[Génétique] pb clonage moléculaire

Traitement de l'ADN linéarisé du plasmide vecteur avec la phosphatase alcaline qui enlève les groupes 5' phosphate terminaux évité la recirculation du vecteur et la formation de dimères de plasmide. Après ce traitement, on puisse donc ajouté l'insert.  [...] Les cellules de Ecoli et l'ADN plasmidique interagissent de façon productive en présence d'ions calcium et à base Température (o-5°C).  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

bonjour tout le monde. s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise. merci d'avance.  [...] Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage directionnel

soit un clonage directionnel d'un insert dans un plasmide vecteur, c'est quand l'adn contenant l'insert et l'adn vecteur sont tout les deux digérés par les mêmes enzymes de restriction, et donc le clonage se fait par appariement d'extrémités cohésives, c'est ça.  [...] Le clonage directionnel est un clonage dans lequel le fragment cloné ne peut se cloner que dans un sens (en effet grace a des enzymes de restrictions qui forment des extremités incompatibles). Le clonage non orienté est un clonage dans lequel le fragment peut s'insérer dans les deux sens.   [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et Clonage

s.v.p j'aimerai bien comprendre la différence entre la PCR et le clonage autrement dit est-ce-que lors d'une amplification de l'ADN le choix entre une PCR et le clonage se fait d'une manière aléatoire ou bien y'a des règles a suivre.  [...] La PCR permet d'amplifier une portion d'un génome d'ADN selon les amorces que tu choisis. Le clonage consiste à insérer un morceau de gène à l'intérieur d'un ADN.. (souvent dans celui d'E.coli via un plasmide, dit vecteur).  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Elles permettent notamment en génie des vecteurs, d'ouvrir un plasmide, et d'y insérer un gène YFG dont les extrémités sont construites pour etre complémentaires avec le site de restriction pour que cela colle pile poil.  [...] On ne clone pas avec un plasmide mais dans un plasmide. Cloner, c'est le fait de reproduire à l'identique quelque chose. Un clone, c'est l'ensemble des éléments identiques (deux jumeaux forment un clone). Ainsi pour cloner de l'ADN, on l'insert dans un vecteur (dans votre cas un plasmide) et on amplifie la quantité de vecteur.  [...]

Intégration dans un plasmide

Non, c'est pas systematique. Ca depend de la qualité de tes digestions, de la taille de ton vecteur et de ton insert. Par contre, ce genre de construction se fait in vitro. Tu transformes ensuite la bacterie par ton plasmide. Pour integrer un fragment d'ADN dans un plasmide deja dans une cellule, je dirais que tu ne peux le faire que par recombinaison homologue, mais c'est bcp plus compliqué et j'ai jamais entendu d'une telle manip pour modiifier des plamisdes.  [...] C'est pour cette raison qu'on utilise un vecteur d'ADN circulaire pour introduire un gène dans une bactérie. Ce vecteur est souvent un plasmide modifié (avec de nombreux sites d'intégration possibles, un promoteur fort avant ces sites, des gènes de sélection pour pouvoir distinguer les bactéries qui ont intégré le plasmide...).  [...]

[Microbiologie] clonage

je dois cloner un fragment d'ADN dans un plasmide pbluescript, j'ai digéré le vecteur par ECO RI je dois effectué une déphosphorylation afin d'éviter la recircularisation de plasmide, comment je peux m'assurer que la déphosphorylation a été faite avec succès après l'avoir traité par la phosphatase alcaline.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide ligature

les questions precedentes portent sur la coupure par BgIII d'un fragment d'adn, de la digestion d'un plasmide avec BamH1, et de la sequence obtenue apres ligation au niveau des jonctions vecteur/insert et insert/vecteur. la question est. Ces jonctions peuvent elles etre recoupées par BamH1 et/ou BgIII.  [...] ce qui m'étonne c'est que tu coupe ton ADN avec une enzyme et ton plasmide avec une autre. Normalement les bouts collants ne peuvent pas se linéariser comme cela.  [...]

[Biotechnologie] recombinaisons site spécifiques par la technologie Gateway

dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).  [...] Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison. c'est le clone d'entrée.  [...]