• Forum - Vecteur, ADN, Intérêt, Infection

[Biotechnologie] vecteurs pGEMT -TOPO- Pbluescript - lambdaZAGII

Nous avons étudiés les différents moyens de cloner de l'ADN et en particulier l'utilisation de plasmides et de phages et des vecteurs dérivés de ces outils.  [...] Ensuite dans le cas du phagemide lambda zagII j'ai compris qu'en gros le vecteur est composé du bras gauche et droit du phage lambda et que la partie centrale a été remplacé par le pbluescript avec l'ADN d'intérêt et qu'apparemment la co-infection avec un phage helper permet ensuite son excision.  [...]

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

Un vecteur de clonage permet, comme son nom l'indique, de faire un clonage, c'est à dire de placer un insert dans le vecteur d'intérêt (ligation) puis après transfection/conjugaison/infection/... de multiplier la quantité d'ADN au cours des divisions bactériennes/des infections virales/... selon le type de vecteur utilisé.  [...] * promoteur (eucaryotes ou procaryotes selon ce qui est recherché), séquences d'initiation de la transcription au sens large, terminaison de la transcription,   [...]

Technique Gateway

je pense que l'interet du vecteur donneur (qui devient vecteur d entrée après avoir récupéré le gène) est qu'il a tout les gènes permettant l'infection lambda et les gènes accompagnateurs de la recombinaison. Et le vecteur de destination (qui devient d'expression) a les gènes permettant la suexpression du gène d'intéret (promoteur inductible ou costitutif,...).  [...] Il n'ont pas pu mettre tout ces gènes (infection+recombinaison+suexp ression du gène d interet) dans le meme vecteur parceque ca prendrait trop de place est ce que c est ca.  [...]

[Biotechnologie] recombinaisons site spécifiques par la technologie Gateway

dans un plasmide jouant le rôle de vecteur donneur et un fragment d'adn contenant le gène d'intérêt flanqué par deux autres sites attB1, attB2 (produit par PCR).  [...] Après recombinaison, le gène d'intérêt a donc été transféré sur le plasmide donneur est cette fois flanqué de deux sites attL1 et attL2 qui sont les produits de la recombinaison. c'est le clone d'entrée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteurs d'expression

l'intérêt de mettre le fragment d'ADN dans le même sens qu'un promoteur est très certainement de permettre une transcription/traduction dans le cas ou l'on souhaite produire une protéine.  [...] D'après ce que j'ai compris de ton propos, l'ADN cloné en orientation inverse serait un contrôle négatif, car le vecteur correspondant ne permettrait pas l'expression de la protéine d'intérêt (en faisant que l'hypothèse que ton fragment d'ADN initial contienne une phase ouverte de lecture, un codon stop, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Transcription in-vitro

Je me demandais pourquoi, lors d'une transcription in-vitro, on doit obligatoirement linéariser le vecteur contenant l'ADN d'intérêt. Par exemple j'ai cloné mon ADN dans le vecteur pSFV1 pour le transcrire in-vitro je dois linéariser le vecteur à l'aide de l'enzyme Spe1 dont le site est situé juste avant le promoteur SP6 nécessaire à la transcription.  [...] Normalement on linéarise un plasmide pour pouvoir mettre un terme à la transcription in vitro. Si on ne linéarise pas, la polymérase transcrit et ne s'arrête pas. Je trouve ça étonnant de linéariser pour aider la polymérase à transcrire. Un vecteur de clonage est constitué de deux promoteurs, un qui sera en amont de notre gène (ADNc) et l'autre en aval.  [...]

levure s. POMBE

le gène d'intérêt est alors inséré dans un vecteur (en général un plasmide), qui doit être capable de se répliquer et de répliquer le gène étranger qui lui est rattaché.  [...] la molécule d'ADN composite obtenue (vecteur + gène d'intérêt) est ensuite introduite dans une cellule hôte(levure S. Pombe PK90b), qui exécute les instructions qui lui sont fournies par le gène d'intérêt, et réalise les modifications post-traductionnelles dans l'objectif de fabriquer la protéine recherchée(l'hormone peptidique ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

[Génétique] phage

bonsoir. J'espere que quelqu'un saura m'éclairer. la partie centrale des phages peut etre utilisée comme vecteur de clonage. mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux pour en faire des sites de restriction d'une enzyme de restriction spécifique, et alors l'adn que l'on veut cloner serait ajouté dans la partie centrale.  [...] mais, est ce qu'on retire cette partie pour la remplacer par un adn d'intéret, ou est ce qu'on enleve seulement quelques morceaux.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Ensuite il faut insérer tout les plasmides dans une bactérie lambda, effectuer une transformation bactérienne pour rendre la protéine native inefficace. Puis la bactérie portant le bon plasmide est sélectionnée parmi toutes les autres sur un milieu nécessitant la protéine d'intérêt (or le gène natif ayant été muté, la protéine ne pourra provenir que du plasmide).  [...] Ainsi, en ajoutant de l'ampicilline au milieu, seules celles avec un vecteur survivent. Vous sélectionnez les bactéries transformées, pas nécessairement celles qui contiennent votre fragment d'ADN d'intérêt.  [...]