• Forum - Utilisation, Enzyme, Restriction

[Génétique] Clonage animal (question)

utilise-t-on des enzymes de restriction ou des plasmides pour cloner un animal ou encore pour faire du clonage thérapeutique.  [...] Pour moi, à partir du moment où on parle de clonage (tout court) il n'y a pas d'utilisation d'enzyme de restriction. la technique de clonage, qu'il soit reproductif ou thérapeutique, est de transférer directement un noyau d'une cellule quelconque dans un ovule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de ligation

Ca fait deux semaines que je tente de faire une ligation entre pCLNCX et mon insert. J'ai coupé mon plasmide par HindIII et amplifié mon insert avec des amorces contenant le même site de restriction HindIII, la taille de mon insert est bonne. celle de mon plasmide aussi, il a bien été digéré car j'ai comparé le plasmide digéré ou non.  [...] est- ce - que tu as procédé à une déphosphorylation de l'extrémité 5' de ton plasmide digérée l'utilisation d'une phosphatase alcaline est necéssaire dans l'étape qui précède la ligation puisque tu utilises un seul enzyme de restriction... car au moment de ligation il va être plus facile à un plasmide de se recirculariser plutôt qu'intégrer une autre séquence.  [...]

enzymes de restriction

quelles sont les differentes utilisations pratiques en medecine ou en science par exemple des enzymes de restriction et quelles sont les methodes qui se fondent sur ces derniers.  [...] toute la génétique moléculaire moderne à partir du milieu des années 70 est basée sur l'utilisation des enzymes de restriction (vrai nom = restriction endonuclease),  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage Gateway...intérêt ?

- un premier intérêt est celui que tu dis. tu n'utilises pas d'enzymes, pas besoin de choisir 2 enzymes différentes, de déphosphoryler le plasmide, phosphoryler les primers...ect... une simple PCR suffit pour l'obtention de ton gène avec les séquences nécessaires à l'introduction dans le plasmide.  [...] ça revient au même qu'avec les enzymes pour l'insertion dans ton second vecteur sauf que là encore, tu n'a pas besoin de rédigérer ton fragment à partir de ton premier plasmide pour le mettre dans un plasmide d'expression. Ici, avec le système gateway, ton plasmide d'entré va directement servir à la recombinaison avec ton second plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] rendre un plasmide linéaire

Effectivement tu utilise une enzyme de restriction à un seul site de restriction.  [...] Je n'ai pas d'exemple là, mais en bref c'est comme si tu coupe un élastique avec des ciseaux. Tu coupe une fois et ton élastique devient linéaire.   [...]

Enzymes de restriction

C'est l'emplacement de la méthylation qui change d'une espèce à l'autre et qui permet à l'enzyme de restriction de reconnaître l'ADN de la bactérie qui la (. -l'enzyme de restriction) synthétise.  [...] Je n'ai pas la réponse mais j'ai fouillé un peu...rien trouvé. Mais après un petit ctrl+F [GGATCC] sur le génome de Bacillus amyloliquefaciens, chez qui on a trouvé l'enzyme de restriction Bamh1, laquelle est insensible à la méthylaton, on remarque que le site cible n'est présent que deux fois son génome.  [...]

[bio mol] hélicase

moi je pensais sinon fabriquer un ADN double brin linéaire. contenant non loint de l'origine de replication un site de reconnaissance d'une enzyme de restriction.  [...] l'experience consiste a mettre l'hélicase et l'enzyme de restriction et on ne devrait plus avoir qu'une bande (car l'enzyme ne peut pas coupé de facon simple brin).  [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

5. Excise the restriction enzyme-insensitive fragments of the same size as the undigested DNA fragment, and purify them with a DNA gel Extraction kit as described by AXYGEN.  [...] 4. Miniprep the plasmids and confirm the correct colonies by repeating the restriction enzyme digestion, but the digestion time can be shortened to 510 min.  [...]

[Biochimie] Petite interrogation sur les enzymes de restrictions

Il y aurait à priori une différence du nombres d'enzymes de restriction utilisé dans le PCR pour multiplier l'ADN. Celui de la France serait différent de celui des Etats-Unis par exemple.  [...] Je pense que ta question part mal dès le début...Tu ne veux pas dire plutôt enzymes de polymérisation par hasard, ce qui me semble plus en accord avec le terme PCR que tu emplois.  [...]

[Génétique] protocole experimental?

3) cultiver en milieu.mutagene.de.sorte.que les. Alleles ou se situent les genes les plus importants soient alteres durablement (cassage de plusieurs codons par l utilisation peut etre d enzymes de restriction appropriees).autremment dit on rendraient les alleles sur ces eucariotes diploides recessifs.  [...] la transcriptase inverse - qui permet au VIH de se répliquer - est une enzyme ne possédant pas de mécanisme de détection des erreurs de transcription. Les erreurs sont donc fréquentes et ont été estimées à une tous les 1 700 à 10 000 nucléotides produits. Comme le génome du VIH est composé d'un peu moins de 10 000 nucléotides, il y a approximativement entre une et 10 mutations à chaque cycle viral.  [...]