• Forum - Transgene, Séquence, Intérêt, ADN, Témoin

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Les gènes codant pour une resistance à l'ampicilline par exemple permettent de sélectionner les bactéries qui ont reçu le transgène. Mais pour ce qui est de l'amplification pour obtenir de grandes quantités de plasmide, c'est tout bête mais l'origine de réplication permet de répliquer le vecteur dans une même bactérie ou bien chez les cellules filles aprés mitose.  [...] Autre chose. dans mon cours j'ai écrit qu'on peut aussi détecter le transgène par PCR en utilisant un couple d'amorce spécifique de celui-ci pour amplifier la séquence d'interet par PCR en utilisant de l'ADN codant un gène murin témoin. Je ne comprend pas, si j'ai bien compris le seul fait de détecter la sequence par electrophorese devrait prouver la présence du transgène, mais alors pourquoi a t'on besoin d'un témoin Est-il indispensable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène Rapporteur

Pour moi, pour avoir la localisation de GFP il faudrait que dans le gène GFP, il y ait une séquence comme NLS(destination vers noyau par exemple), qui serait donc la même que celle de notre gène d'intérêt.  [...] si je comprends bien, si l'on veut connaitre la localisation de la protéine d'intérêt avec une séquence régulatrice(recombinaison homologue), il faut forcément que le transgène possède une séquence d 'ADN de localisation (ex.NLS qui soit identique à la séquence d'ADN de localisation de la protéine d'intérêt) et le gène rapporteur.  [...]

OGM - Clonage d'un gène / Construction du trangène

Par ailleurs pour créer un OGM il va aussi falloir créer un transgène, c'est à dire notre séquence d'intérêt mais aussi y ajouter un promoteur, éventuellement des séquences régulatrices et tout ca. Mais comment se fait cette étape la Et une fois que l'on a formé notre transgène, il faut de nouveau utiliser un vecteur pour remultiplier notre séquence d'intérêt.  [...] Je comprends pas bien en quoi le clonage du gène est intéressant. Puisque on pourrait théoriquement formé notre transgène, l'inséré dans un vecteur qui se multiplie et ainsi avoir une grande quantité de séquence d'intérêt sans passer par le clonage.  [...]

[Génétique] Production de souris transgéniques

Quand on fait de la recombinaison homologue, on transfecte des cellules ES avec l'ADN d'intéret. Par homologie, l'ADN s'intègre à l'endroit qu'on veut dans le génome. grâce à une sélection seules les cellules qui ont reçu le transgène au bon endroit survivent.  [...] Les FRT, c'est pas pour l'injection en elle même. C'est juste que si tu le souhaite, tu peux placer autour de ton gène d'intérêt des sites FRT. Ca permet, si tu fournis une source de flipase, d'induire une recombinaison site-spécifique et donc d'exciser le gène placé entre les séquences FRT.  [...]

[Biologie Moléculaire] amorces PCR et séquençage

qqun pourrait-il me dire si on peut utiliser des amorces de PCR pour vérifier par séquençage la présence correcte d'un transgène après transfection je précise que les amorces marchent très bien en PCR et révèlent que le gène d'intérêt est bien là mais peut-on utiliser ces mêmes amorces ensuite dans une réaction de séquence.  [...] on ne le fait peut être que rarement parce qu'on préfère séquzencer la région d'insertion également, donc on préfère une amorce placée un peu en amont.   [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

Et par ailleurs, on dispose de nombreuses souches UAS qui comportent un transgène avec les séquences UAS devant la séquence codante d'un gène choisi. Par exemple le gène codant la GFP, qui fluoresce quand on l'expose à une lumière UV au microscope.  [...] Une autre approche est la suivante. si tu t'intéresses à une gène particulier, que tu aurais identifié par lecture de la séquence par exemple, tu peux isoler ses séquences régulatrices, même grossièrement, et les placer devant gal4, dans ton transgène. Une fois inséré, l'expression du transgène devrait suivre celle de ton gène d'intérêt, avec souvent des variations d'intensité suivant la localisation du transgène dans le génome (effet de position).  [...]

Questions sur le Kit "genomewalking" de clontech

je vais utiliser ce kit genomewalking de clontech pour regarder les sequences flanquantes d'un transgene sur de l'adn genomique de souris modifieés, et savoir si j'ai 1 ou plusieurds sites d'insertions.  [...] Les pcrs 1er et seconde sont avec des temps d'elongation de 3 min.   [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

Il me semble qu'habituellement on intègre le gène de résistance et le transgène au niveau du même site, c'est à dire que les séquences homologues sont placées de part et d'autre du gène de résistance et du transgène accolés. séquence homologue 5' - gène de résistance - transgène - séquence homologue 3', pour faire simple.  [...] Tes problèmes proviennent certainement, pour les cellules CHO, de la présence d'une séquence homologue entre le gène de résistance et le transgène, excluant ainsi le transgène de l'intégration dans le génome de hamster. Pour les cellules 293, pas de séquences suffisamment homologues à une région du génome humain pour permettre l'intégration de ton matériel génétique.  [...]

rats KO

Un transgène n'est pas obligatoirement de l'ADN étranger, ça peut très bien être de l'ADN de la même espèce, d'une espèce différente, ou même de l'ADN viral.  [...] Non pas forcément. Un transgène est un fragment d'ADN que tu insères dans une cellule mais l'ADN en question peut très bien être la copie d'un gène endogène à l'espèce transfectée.  [...]

[Biotechnologie] Interférence à l'ARN

Pour intégrer un gène par recombinaison homologue, il faut que ton gène d'intérêt possède des séquences flanquantes homologues à la région où tu veux l'insérer. Après si tu veux savoir toutes les étapes, ça sera avec plaisir que je te les donnerai.  [...] Ton gène à introduire (que j'appellerai gène X) doit posséder des séquences homologues à celles situées entre le gène d'intérêt (que j'appellerai gène Y) à muter. Ton transgène plasmidique X est.  [...]