• Forum - Transgene, Intérêt, Réaction, Séquence

[Biologie Moléculaire] amorces PCR et séquençage

qqun pourrait-il me dire si on peut utiliser des amorces de PCR pour vérifier par séquençage la présence correcte d'un transgène après transfection je précise que les amorces marchent très bien en PCR et révèlent que le gène d'intérêt est bien là mais peut-on utiliser ces mêmes amorces ensuite dans une réaction de séquence.  [...] on ne le fait peut être que rarement parce qu'on préfère séquzencer la région d'insertion également, donc on préfère une amorce placée un peu en amont.   [...]

OGM - Clonage d'un gène / Construction du trangène

Par ailleurs pour créer un OGM il va aussi falloir créer un transgène, c'est à dire notre séquence d'intérêt mais aussi y ajouter un promoteur, éventuellement des séquences régulatrices et tout ca. Mais comment se fait cette étape la Et une fois que l'on a formé notre transgène, il faut de nouveau utiliser un vecteur pour remultiplier notre séquence d'intérêt.  [...] Je comprends pas bien en quoi le clonage du gène est intéressant. Puisque on pourrait théoriquement formé notre transgène, l'inséré dans un vecteur qui se multiplie et ainsi avoir une grande quantité de séquence d'intérêt sans passer par le clonage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

il doit contenir un marqueur de sélection pour sélectionner les cellules qui le possèdent (beaucoup ne l'auront pas reçu durant la transformation).   [...] Autre chose. dans mon cours j'ai écrit qu'on peut aussi détecter le transgène par PCR en utilisant un couple d'amorce spécifique de celui-ci pour amplifier la séquence d'interet par PCR en utilisant de l'ADN codant un gène murin témoin. Je ne comprend pas, si j'ai bien compris le seul fait de détecter la sequence par electrophorese devrait prouver la présence du transgène, mais alors pourquoi a t'on besoin d'un témoin Est-il indispensable.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

L'intégration d'un transgène dans le génome se fait par recombinaison homologue. Cela nécessite la présence, de part et d'autre de la région du plasmide à intégrer, de séquences présentant une homologie forte avec la zone du génome dans laquelle on souhaite l'intégrer.  [...] Si ton gène de résistance s'intègre et pas ton transgène, c'est certainement un problème au niveau des séquences homologues qui permettent l'intégration de ces gènes.  [...]

[Biotechnologie] Interférence à l'ARN

Pour intégrer un gène par recombinaison homologue, il faut que ton gène d'intérêt possède des séquences flanquantes homologues à la région où tu veux l'insérer. Après si tu veux savoir toutes les étapes, ça sera avec plaisir que je te les donnerai.  [...] Ton gène à introduire (que j'appellerai gène X) doit posséder des séquences homologues à celles situées entre le gène d'intérêt (que j'appellerai gène Y) à muter. Ton transgène plasmidique X est.  [...]

[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Quand on veut faire de la thérapie génique on est confronté à plusieurs problèmes dont la taille du transgène. Ton gène thérapeutique correspond à une séquence codante incompressible, toute l'information doit être contenue dans le vecteur.  [...] .. c'est surtout que le matériel génétique viral conservé pour le vecteur est indispensable, par exemple pour l'intégration du transgène dans le cas des lentivirus (cette séquence conservée est le LTR dans ce cas).  [...]

PCR et gamètes

on prend un mâle et une femelle hétérozygotes pour le transgène, les cellules transgéniques se trouvent dans les gonades et donnent des gamètes. On prélève des gamètes portants le gène d'intérêt repéré par PCR.  [...] Si ton animal est hétérozygote ca signifie qu'il est +/- pour ton gène d'interet. Si tu veux savoir si il est +/- tu n'as pas besoin d'aller là où le gène s'exprime. Tu peux faire ta pcr sur de la peau ou ce que tu veux.  [...]

[Divers] Méthodologie de révision/ le futur de la biotechnologie

Comme j'ai cité en haut, je suis un étudiant en biotechnologie, et ça c'est pratiquement un nouveau domaine, je suis très confuse de ne pas avoir un boulot après ma graduation,et si je trouve, es qu'on peut comparer le niveau d'un biotechnologue (ingénieur ou chercheur ) avec le niveau d'un médecin ( je veut dire avec niveau les bénéfices qu'il donne pour la science ou encore la société, ses salaries.   [...] Il y a tellement de choses qu'on fait avec des biotechnologies qu'il est très difficile (impossible ) d'en faire la liste exhaustive. Par exemple améliorer des semences en une ou deux générations par un transgène d'intérêt. Créer des modèles de maladies sur des rongeurs pour mieux les guérir.  [...]

[Biochimie] nucléase

Tu commences par ouvrir ton plasmide avec une enzyme de restriction, tu fais agir ta phosphatase, et tu peux ensuite tranquillement faire ta réaction de ligation entre ton transgène et le plasmide (et ainsi éviter que ton plasmide ne se referme sur lui-même et d'avoir bossé pour rien).  [...] Ton insert (j'entends par là la séquence codante de ton gène d'intérêt) (putain c'est tellement plus pratique d'expliquer en parlant et avec un tableau ) ben il a un sens, la séquence doit être lue dans ce sens et pas dans l'autre. Allez, un exemple. ton gène fait 9 pb.  [...]

GFP et mcherry

1) Si je comprends bien on utilise les gènes qui codent pour la GFP et la mcherry, qui seront insérés (liés au promoteur) dans un transgène, quand ceux ci seront traduits en protéines il y aura fluorescence et donc on pourra détecter si il y a eu expression de notre gène d'intérêt.. Ai je bien compris.  [...] Pas vraiment.. il s'agit juste de révéler l'expression d'un gène... Pour cela on introduit par agroinfiltration plusieurs types de plasmides soit avec le gène d'intérêt sur exprimé ou pas, à ce gène est couplé la GFP et la mcherry (d'ailleurs je ne sais même pas où l'on place la mcherry) c'est pour ça que je ne vois pas son intérêt.  [...]