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[Biochimie] Plein de questions de bioch

Les souris chimères (ou souris mosaïque) ont des cellules germinales portant un transgène. En revanche, leur cellules somatiques ne contiennent pas le transgène.  [...] 1. On injecte le transgène dans une cellule de morula (8-16 cellules). On prie assez fort pour que le transgène s'insèrt dans le génome (je simplifie, la prière ne fait pas tout ).  [...]

[Biologie Cellulaire] Stabilité d'une transfection

Je transfecte des cellules rétroviral avec un plasmide adapté auquel j'ai intégré mon gène d'intérêt ainsi qu'un gène de résistance au G418.  [...] Suite à une transfection réalisé grâce à de la lipofectamine j'ai une expression transitoire de mon gène d'intérêt, cependant pendant la phase de sélection avec le G418 de façons général toutes les cellules meurent et je ne peut pas récupéré de clone stables.  [...]

[Biologie Cellulaire] Expression stable: perte du transgène

Il me semble qu'habituellement on intègre le gène de résistance et le transgène au niveau du même site, c'est à dire que les séquences homologues sont placées de part et d'autre du gène de résistance et du transgène accolés. séquence homologue 5' - gène de résistance - transgène - séquence homologue 3', pour faire simple.  [...] Tes problèmes proviennent certainement, pour les cellules CHO, de la présence d'une séquence homologue entre le gène de résistance et le transgène, excluant ainsi le transgène de l'intégration dans le génome de hamster. Pour les cellules 293, pas de séquences suffisamment homologues à une région du génome humain pour permettre l'intégration de ton matériel génétique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Le nombre d'insertions d'un transgène

Ma question est. Quellles sont les différentes approches qui permettent de déterminer le nombre d'insertion d'un transgène dans le génome d'une plante après une transformation génétique par Agrobacterium.  [...] Je n'y connais pas grand chose en biologie végétale mais la question reste un problème de bio mol donc si tu connais la séquence de ton transgène tu fais de la qPCR et tu auras le nombre de fois où il est présent dans le génome de ta plante. Si il est déjà présent tu fais une qPCR comparative avec une plante dont tu connais le nombre précis et fixe de ce gène.  [...]

[Génétique] Questions à propos de la thérapie génique

Si j'ai bien compris, une cellule transcomplémentante est une cellule qu'on a préalablement modifiée pour qu'elle apporte les gènes manquants. Pourquoi trans parce que les gènes complémentants, c'est à dire ceux qui manquent, sont présents sur une autre molécule d'ADN (un plasmide ou le génome nucléaire/chromosomique) que la molécule introduite.  [...] Certains virus permettent juste d'introduire le transgène dans la cellule sans pour autant l'intégrer au génome. Ce qui implique une dilution du transgène au cours des divisions cellulaires.  [...]

compter des cellules/marquer de l'ADN/transgenese

- lors de l'introduction du transgène dans le génome de ma cellule souche grace a un plasmide comment faire pour savoir sur quel chromosome s'est insérer le gène.  [...] Pour résumer, la transgénèse se fait sur cellules ES par Rec. Hom., on sreen plusieurs centaines de clones (vérifie l'intégration par PCR) et on injecte l'embryon au stade de morulla, ensuite il faut prier pour que la lignée germinale soit touchée, sélectionner une descendance positive et refaire une croisement si nécessaire (s'il est hétérozygote).  [...]

[Génétique] Systeme GAL4/UAS

Au passage, le gène lacZ a beaucoup été utilisé comme gène rapporteur (il l'est surement un peu moins aujourd'hui), en complément de la GFP et avant qu'on utilise la GFP. La réaction béta-galactosidase présente l'avantage d'être très sensible. Si tu dois screener 300 lignées pour trouver celles qui s'expriment dans le cerveau, il vaut mieux utiliser lacZ, en laissant agir la béta-gal pendant 12h tu verras surement de grosses taches bleue apparaître, visible à l'Sil nu, même si ton transgène ne s'exprime que dans quelques cellules.  [...] Une autre approche est la suivante. si tu t'intéresses à une gène particulier, que tu aurais identifié par lecture de la séquence par exemple, tu peux isoler ses séquences régulatrices, même grossièrement, et les placer devant gal4, dans ton transgène. Une fois inséré, l'expression du transgène devrait suivre celle de ton gène d'intérêt, avec souvent des variations d'intensité suivant la localisation du transgène dans le génome (effet de position).  [...]

animal transgénique homozygote

Pour avoir un animal réellement transgénique il faut tout d'abord insérer le gène d'interet dans le génome d'une cellule ES, injecter la cellule dans un embryon, il faut qu'elle s'implante dans les gonades de l'embryon, puis il faut faire des croisements pour obtenir un animal homozygote pour le gène.  [...] Tu peux peut -être plutôt modifier directement ton embryon au stade cellule unique, ce qui permet d'avoir le transgène dans toutes les cellules.  [...]

sélection et OGM

Pour en revenir précisément à la transgénèse artificielle (OGM), dans un article de Journal of Biomedecine and Biotechnology 2006, on précise que l'insertion est rarement un acte précis. A la suite de cela, des mutations du génome sont très souvent observées.  [...] Pour résumer, la transgénèse entraine des modifications internes du génome autres que l'insertion du simple transgène, et d'autre part l'utilisation du virus CaMV risque la dissémination d'un briseur de génome les plus performants dans l'environnement.  [...]

[Génétique] Pour ou contre la transgénèse ?

Je ne pense pas que le clonage puisse être pris en compte comme transgénèse. En revanche ces deux techniques peuvent être couplées pour soigner - on prend une cellule souche malade qu'on rend saine grâce à un transgène choisi, on cultive pour s'assurer que tout va bien et on réimplante ce clône de cellules saines dans l'hôte malade.  [...] Actuellement, la transgenèse consiste à insérer un gène connu dans un génôme lui aussi connu, de manière à ce que la (ou les) protéine(s) codées par le transgène soi(en)t exprimée(s) dans l'organisme transgénique.  [...]