• Forum - Traitement, ADN, Tampon

[Biologie Moléculaire] RNase A

Bonjour, quelqu'un peut-il me donner un protocole détaillé pour faire un traitement de 40µl d'ADN génomique dans du tampon d'élution avec de la RNase A à 10mg/ml (fermentas) SVP.  [...] je dirais que ça dépend de ce que tu comptes faire avec ton ADN ensuite... Précipitation ou phénol/chlo ou meme juste inactivation (je sais pas si c'est possible avec la RNase).  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Je voudrais connaître le rôle précis des composants du tampon d'extraction que j'utilise, the Edward Buffer, pour extraire l'ADN de pétunia.  [...] - EDTA. inhibiteur des métallo-enzymes comme les nucléases qui dégradent l'ADN. Il séquestre les ions magnésium Mg2+ et bloque ainsi l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion.  [...]

[Divers] Intérêts du NaDOC, SS DNA, chelex, Tris Cl dans plusieurs expériences

Je réalise des ChIP (chromatin immunoprecipitation), et après extraction de l'ADN sur lequel les protéines ont été crosslinkées au formaldehyde, l'ADN est dans un tampon dit d'immunoprécipitation. celui-ci contient du NaDOC... à quoi cela sert-il.  [...] Je ne connais pas suffisement les protocoles que vous utilisez, cependant l'utilisation de Tris Cl sert milieu tampon. Il permet de conserver un ph régulier durant toutes vos expériences. Ainsi, travaillant avec de l'adn et des protéines, tous deux très semsibles aux changements de ph, vous évitez des dénaturations.  [...]

Gel Shift : problème avec la compétition

Ca arrive souvent qd tes conditions ne sont pas optimales et/ou que l'affinite de ta proteine pour l'ADN est tres important. Tu peux essayer de mofier la composition du tampon de shift. Es tu sure que ta proteine se fixe sur cette sequence d'ADN Comment l'as tu identifiee.  [...] - Quelles modifications de tampon puis-je faire sachant que je suis dans les mêmes conditions que celles utilisées par les auteurs ayant montré une spécificité avec la séquence d'ADN X.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...] Tampon d'élution. souvent composé majoritairement d'eau. Il solubilise l'ADN après nettoyage.  [...]

Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisée du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montre que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] il y a une section biologie dans le forum, ta demande y serait mieux placée.   [...]

[Biochimie] Tampon TE

A la fin d'un extraction d'ADN, je me suis trompée, jai utilisé du tampon TE 10X au lieu du tampon 1X.. et mes mesures au spectrophotometre me montrent que jai tres peu voir pas du tout d'ADN.. pensez vous que ce soit dû à l'utilisation de tampon TE10X Est ce que je peux y remedier parce que le probleme cest que je nai plus les echantillons à l'origine de l'extraction.  [...] La force ionique est un parametre essentiel pour le decrochage de l'ADN des colones, donc oui avec un TE10X tu as toute les chances que l'ADN soit encore dans la colone.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fabrication Solution CTAB

Et là je vois que je n'obtiens pas de pelotte d'ADN. Une fois mon extraction terminée je dose au spectro et j'obtiens des quantités ridicules du genre 12µg/mL...Je pense donc que mon pb vient du fait que la lyse ne se fait pas correctement, donc je dois avoir un pb avec mon tampon CTAB (ce qui est fort probable puisque je n'ai pas de protocole précis pour le réaliser) mais je ne vois pas comment résoudre mon pb.  [...] Il faut surtout bien agiter dans le phénol sinon ton adn ne passe pas en phase. Tu peux faire un contrôle en essayant de précipiter l'ADN directement après la lyse dans le CTAB (apres clarification éventuellement) en ajoutant un volume d'isopropanol et en agitant bien.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Quand au gel, un simple gel d'agarose fait l'affaire, le tampon de migration phosphate est bon aussi. je crois qu'il est également possible de marquer l'ADN à l'aide de nitrate d'argent (vieux matériel photographique). Bref, à part l'étape de PCR, tout est théoriquement faisable dans la cuisine (ultra-propre pour éviter les contaminations ).  [...] Par traitement informatique, la marge d'erreur risque d'être importante. En cause, le chevauchement de bandes. Admettons que l'amplification du micro-satellite 1 (exemple) du tube A donne 3 bandes de tailles différentes (50, 100 et 150). La même amplification pour l'échantillon B donne 40, 100 et 180.  [...]