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Culture cellulaire: ciprofloxacine en routine

Certains d'entre vous ont-ils déjà entendu parler de l'utilisation en routine (prévention de contamination) de ciprofloxacine (. 0,1%) comme antibiotique (remplaçant du mélange Pen/Strep) en culture cellulaire.  [...] Un fournisseur le propose, vantant ses effet préventifs sur les contaminations par les mycoplasmes en plus des bactéries, champignons et autres contaminants habituels, mais je voudrais m'assurer que ce n'est pas plus toxique qu'un autre antibiotique pour mes cellules (fibroblastes de souris).  [...]

sélection par résistance à un antibiotique ou agent extérieur

Bonsoir à tous, je ne comprends pas en quoi devenir plus résistant à un antibiotique ou un agent toxique permet de vérifier qu'une cellule hôte dont on veut introduire un gène d'intêret ait bien été intégré.  [...] Pour vérifier la bonne transfection de tes bactéries (par exemple) par ton plasmide ayant le gène d'intérêt, en ayant un gène de résistance à un antibiotique dans ton plasmide, tu vas sélectionner uniquement les cellules ayant reçu le plasmide, car.  [...]

[évolution] Théorie de l'évolution?? vrai ou faux... - Page 4

On prend une culture de bactérie pure (toute les cellules sont des clones de la même cellule originale). Celle ci est sensible à un antibiotique donné. On étale cette culture sur une boite de milieu nutritif contenant l'antibiotique en question. Toutes les cellules meurent.  [...] .. sauf quelques unes (environ 1 sur 1 million). Si on prend ces cellules survivantes et qu'on les repique de nouveau sur un milieu contenant le même antibiotique, elles survivent.  [...]

[Biologie Cellulaire] transfection

Pour faire une selection des cellules transfectées, il faut par exemple que le plasmide possède un gène de résistance à un antibiotique (puromycine par exemple), ainsi seules les cellules transfectées vont survivre pendant une culture en présence de l'antibiotique.  [...] On peut aussi utiliser un plasmide qui code pour une protéine de fusion. la séquence nucléotidique de la protéine est flanquée de celle d'un fluorophore qui va être transcrit et traduit en même temps que la protéine. Ainsi, par microscopie à fluorescence, les cellules fluorescentes sont celles qui ont intégré le plasmide et exprimé la protéine d'intérêt.  [...]

Généticine antibiotique

on utilise la généticine pour sélectionner les cellules ES. Il s'agit d'un antibiotique eucaryote. Alors je ne parviens pas à trouver.  [...] Le gene neoR code pour une aminoglycoside-phosphotransferase. Donc les celllules qui ont ce gene inactive les aminoglycosides par phosphorylation, et l'antibiotique ne peut plus se fixer sur les ribisomes, et ta cellules est resistante.  [...]

bonjour à tous

Sélectionner les cellules résistantes, soit naturellement (certaines lignées de celluels en culture), soit consécutivement à une transgénèse.  [...] l'hygromycine agit sur la synthèse protéique chez les eucaryotes en bloquant la translocation du ribosome sur l'ARNm (le peptidyl-ARNt reste sur le site accepteur du ribosome.). Ce blocage serait probablement dû à une interaction avec le facteur d'elongation EF-2 soit en le déplacant du ribosome soit en bloquant son activité.   [...]

[évolution][physiologie][embryologie] Mes grandes questions :

- Neurologie. Prenons l'exemple de la vision. comment à partir des cellules receptrices de lumière dans notre retine, je sais que naissent des potentiels d'action qui codent en frequence la couleur mais mon probleme vient à l'arrivée au cerveau. comment tous les potentiels venant de toutes les cellules peuvent se coordonner et donner une image.  [...] Prenons un exemple simple (voire simplifié). une bactérie possède un gène de résistance à un antibiotique. Tant qu'il y a de l'antibiotique dans le milieu de culture, ce gène est actif et donc transmis sans faute à toute la descendance. toutes les cellules dans lesquelles ce gène est altéré meurent avant d'avoir pu se reproduire.  [...]

Antibiotiques

Mais la définition a évolué avec son temps, et désormais tout composé obtenu par génie chimique ou biotechnologique ayant un spectre d'activité à faible dose contre des micro-organismes peut être désigné comme antibiotique (enfin telle était la définition retenue en cours de bactério médicale).  [...] La plupart des antibiotiques populaires sont des antibactériens, mais celà ne justifie pas à mes yeux d'assimiler le terme antibiotique uniquement aux molécules actives contre les bactéries. C'est un risque de confusion lorsque justement, certains antibios sont toxiques pour les cellules eucaryotes et procaryotes.  [...]

[Génétique] Production d'interleukine 2

Pour produire la protéine à partir de là, il faut que tu réalises une transfection en cellule eucaryote (HEK293 par exemple) en utilisant un agent de transfection (lipofectamine...). Tu appliques également une pression de sélection par un antibiotique. Là il va falloir attendre un peu et comparer la mortalité de tes cellules avec des HEK non transfectées également sous antibiotique.  [...] L'Il2 étant sécréter, cela va te simplifier la vie... Après ta sélection, tu peux prendre ton surnageant de culture, le concentré un peu (centricon) et réaliser une analyse par électrophorèse SDS PAGE ou encore mieux en western blot afin de valider que tes cellules produisent ta protéine.  [...]

Réactifs de biomol

.. On ajoutait aussi un antibiotique pour selectionner les cellules ayant incorporait le plasmide (dans mon cas, c'est amp). On y a aussi ajoutait un sérum contenant un facteur de croissance (un EGF pour notre expérience). Et enfin, on y a ajouté un truc appelé Fung je crois.  [...] Pour ce qui est du plasmide dans la cellule euh bah... je sais pas, on m a dit qu'on mettait de l'antibiotique... Mais apparemment pas pour sélectionner les cellules mais pour éviter l'éventuelle contamination par des bactéries, au meme titre que Fung apparement.  [...]