• Forum - Température, ARN, éthanol

[Biologie Moléculaire] Conservation ARN

J'ai déjà vu des ARN se dégrader en moins de 18 mois à -20°C. Je conseille le -80°C et/ou maintenant on trouve des publicités avec des solutions pour stocker l'ARN à température ambiante.  [...] Pour le long terme il est indispensable que les ARN extrait soient conservés à -80°C. Néanmoins, tu peux les laisser à -20°C pour du court terme mais l'idéal pour cette température c'est que les ARN soient dans de l'éthanol mais dans tous les cas -20°C=court terme car ca se dégrade rapidement.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN ethanol 70%

Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre.  [...] Merci pour la réponse, mais un point reste un peu obscure, les ARN sont insolubles dans l'alcool, c'est pour ça qu'ils précipitent c'est ça Et si ce que je vient de dire est juste, avec l'ethanol 70%, les ARN vont dans l'eau et les sels dans l'alcool.  [...]

[Biologie Moléculaire] Culot d'arn

pourquoi faut-il laver les culots d'ARN avec de l'éthanol à 70% et non avec de l'éthanol pur.  [...] pour redissoudre une partie des sels qui ont servis a la precipitation. Idem avec l'ADN.   [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN plasmidique

Pour le phenol, il se trouve qu'avant il fallait le saturé soit même et maintenant il s'achète tout fait, enfin saturé quoi. Pour l'extraction d'ADN on utilise du phénol saturé avec du tris et pour l'extraction d'ARN avec de l'eau. A ce que l'on m'a dit, les ARN reste dans la phase aqueuse et les protéines resteraient dégradées à l'interphase.  [...] Un volume d'éthanol 100% froid est ajouté au surnageant afin de précipiter l'ADN plasmidique pendant 5 minutes à température ambiante. Après 5 minutes de centrifugation à 10000 g, le surnageant est éliminé et le culot est lavé dans une solution Tris 0,1 M / éthanol 70% puis dans l'éthanol 100%.  [...]

[Génétique] Extraction, purification et analyse d'ARN (Nanodrop et bioanalyser)

De façon générale, s'agit-il de fixer l'amorce sur les séquences qui subissent la RT Dans ce cas...à quoi sert-il d'élever la température à 65 °C Parce qu'il semble superflu de dénaturer (on a affaire à des ARN simples brins). Serait-ce une température idéale pour fixer l'amorce sur les séquences cibles.  [...] Certains ARN sont bourrés de structures secondaires. Cela permet de les enlever. L'étape importante est de placer les ARN directement dans la glace apres l'étape a 65°, car les laisser regagner la température d'élongation (42°) leur permettrait de se renaturer.  [...]

[Génétique] Principe de l'extraction d'ARN???

L'ADN et les prot résiduelles sont éliminées par les lavages (RW1 et RPE). L'éthanol du tampon permet aussi d'éluer selectivement l'ADN afin de n'obtenir que l'ARN au final.  [...] Pour simplifier les ARN sont retenus essentiellement par des laisons hydrogènes. La silice réagit plus ou moins selon la teneur en eau du milieu (d'où l'utilisation d'éthanol). Pour réactiver une silice on la charge en eau d'où l'élution finale de l'ARN dans l'eau qui la libère de l'ARN en remplaçant les liaisons H silice-ARN par des liaions H silice-eau.  [...]

Solubilité d'ADN et d'ARN

L'ARN ET l'ADN précipitent lorsque la concentration en ethanol augmente.  [...] Okay. je comprends mieux mtn merci bcp pour votre réponse.   [...]

[Biologie Moléculaire] Précipitation et conservation d'ARN

L'eau RNase free pour préparer l'acétate est précieuse et si je commence à douter de la poudre utilisée par des collegues sans gants + pH mètre + HCl pour ajuster le PH à 5,2 j'ai peur de contaminer mon ARN (sachant que l'autoclave ne détruit pas toutes les RNases).  [...] Ma question est donc. vaut-il mieux préparer de l'acétate de sodium avec de l'eau RNase free et ne pas ajuster le pH (au moins pas besoin d'un gros volume necessaire pour immerger la sonde mais le PH est supérieur à 7) ou vaut-il mieux preparer l'acétate avec de l'eau PPi et ajuster le pH puis autoclaver le tout Quelle est la solution la moins pire.   [...]

MCF7 cellules cancéreuses, 3 bandes ARN?

je travailles sur des cellules MCF7 de cancer mammaire humain donc eucaryote. après mon extraction d'ARN et migration sur gel j'observe 3 bandes or je n'attends que 2 bandes correspondant aux ARN r 18S et 28S.  [...] effectivement mes échantillons d'ARN sont extraits o trizol (phénol-isothiocyanate de guanidine)-chloroforme, précipités à l'isopropanol et lavé à l'éthanol. protocole classique.  [...]

[Génétique] PCR ou RT-PCR

- que l'extraction d'ARN est plus lourde (plus fragile, les RNases sont pratiquement impossible à inhiber complètement) que l'extraction d'ADN. Et plus chère il faut du matériel plutôt spécifique pour être sur de réussir.  [...] Sinon quant au coût et à la difficulté d'extraire de l'ARN, là encore j'ai du mal. Pour extraire de l'ARN il suffit d'avoir du trizol, du chloroforme, de l'isopropanol, de l'ethanol et une centri réfrigérée. Le trizol était cher pendant un moment mais maintenant il est meilleurs marché.  [...]