• Forum - Température, ADN, Forme

[Biologie Moléculaire] Courbes PCR en temps réel

Pour s'assurer de la spécificité de l'amplification, on réalise a la fin des cycles d'amplification une rampe de température qui permet de déterminer le point de fusion des produits formés. Pour cela, on fait passer la température de 55 à 85° par petits intervalles tout en mesurant la fluorescence.  [...] Comme la fluorescence disparait quand l'ADN est dénaturé, lorsque l'on atteint la température de fusion de notre produit, il ya une grosse chute de l'intensité de fluorescence. On représente ça sous forme de vitesse de disparition de la fluorescence en fonction de la température, comme en C ou D.  [...]

Température d'hybridation et PCR

La réponse est simple, il suffit de savoir ce qu'est... theoriquement... le Tm. Le Tm est la température à laquelle statistiquement, il n'y a que la moitié des liaisons des appariements qui sont formés. Et la moitié, c'est bien insuffisant pour un hybridation d'amorce.  [...] Justement c'est ce que je ne comprends pas. Dans ce cas on devrait prendre une température supérieure au Tm pour être sur que l'on a plus de 50% d'ADN sous forme monobrin. Si on prend une température inférieure au tm, ça veut dire qu'on aura plus d'ADN sous forme double brin que sous forme simple brin. alors pourquoi Tm-5.  [...]

Dénaturation de l'ADN

La chaleur ne permet que de rompre les liasons faibles (ioniques, interactions hydrophobes, liaisons hydrogenes...). Elle ne peux pas ionisé (sauf temperature extreme...), donc rompre des liaisons covalente (dans la plupart des cas...si il y a un effet mesomère, il se peut qu'une forme ionisé de la molécule en question se forme).  [...] ils se font dans le sens contraire que l'enroulement de l'hélice d'ADN. Mais, lorsque l'on augmente la température, les super tours devienne positifs. c'est ce qui se passe pour les bactérie qui vivent dans des températures élevée.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR et température d'hybridation

Tu sais ce qu'est la Tm. la température à laquelle la moitié de ton ADN double-brin est sous formé simple-brin. La T°hybridation est donc celle où tes oligos (ADN simple-brin) s'hybrideront le mieux avec ta matrice. Si tu as, admettons, une hybridation de quelques nucléotides en 3' pas loins de ton autre oligo, voilà une bande.  [...] Cette étape (généralement 2 à 60 secondes à 56-64°C) permet aux amorces sens et anti-sens de s'hybrider aux ADN matrice grâce à une température qui leur est thermodynamiquement favorable. Peu de brins d'ADN matrice peuvent s'hybrider (se lier) avec leur brin complémentaire, ce qui empêcherait la fixation des amorces, car ces dernières sont bien plus courtes et en concentration bien plus importante.  [...]

[Journal club] Reponse strigente et regulation globale de l'expression

Est-ce que cet élégant modèle, montré chez E. coli, a été retrouvé chez d'autres bactéries D'autres part, comment se produit le surenroulement au niveau des promoteurs chez les bactéries Si ce surenroulement est provoqué de manière spontanée grâce à la capacité de l'ADN à former des structures secondaires, est-il possible de retrouver ce mécanisme de régulation chez des bactéries thermophiles (si ce n'est pas déjà fait ).  [...] La question des thermophiles était posée dans le sens où le superenroulement est causé par la formation de structures secondaires de l'ADN. Si une structure particulière du promoteur est nécessaire pour déstabiliser le complexe, les bactéries thermophiles ne peuvent peut-être pas se permettre d'avoir un tel mécanisme de régulation de l'expression, étant donné qu'à haute température, les affinités d'hybridation de motifs de l'ADN sont plus faibles.  [...]

températures et PCR

La température d'hybridation c'est celle qui permet que les amorces se fixent à la matrice si je comprends bien et le Tm c'est la température a laquelle il y a 50% de simple brin mais je n'arrive pas a faire le lien avec les amorces parce que ça c'est la dénaturation non.  [...] Pour que tes amorces puissent s'hybrider à la matrice d'ADN, il faut que celle-ci sois dénaturée pour permettre l'accessibilité des amorces. Ainsi à Tm-5°C on considère que l'hybridation peut se faire correctement. Et oui, le Tm est la température à laquelle tu as 50% de ton ADN sous forme simple brin (et donc 50% en double brin).  [...]

[Biochimie] Conservation ADN à température ambiante

J'ai fait une énorme boulette et ai laissé mon ADN à température ambiante pendant 4jours.  [...] Sachant qu'il ne fait pas très chaud ces derniers jours, je voulais savoir s'il était possible que mon ADN ne soit pas complètement foutu.  [...]

[Biochimie] spectre d'absorption et ADN

soit un ADN naturel mitochondriale de lapin [0.4M], bicaténaire, hélicoïdale, circulaire, comportant 500pb et un ARN naturel d'E.Coli [0.4M] monocaténaire, pseudo-hélicoïdale à 30% comportant 250b.  [...] Du coup si on prend par exemple un pic de 1 pour l'ADN, l'ARN devrait être à 0.5, mais avec l'effet hyperchrome, une partie se retrouve avec +40% donc 0.7. Or tu as 30% de ton ARN enroulé donc à 0.5 et 70% simple brin donc à 0.7. Ce qui donne au final. DO du pic ARN= (30%*0.5)+(70%*0.7)= 0.64.  [...]

Grippe Mexicaine (grippe A-H1N1), vos questions. - Page 20

Son petit frère n'a rien pour l'instant, mais avant elle, le we dernier, il a eu de la temperature(39) mais rien de terrible, il était en forme. pensez-vous qu'il ait pu faire une forme légère ce we et l'avoir passée à se soeur ensuite.  [...] Une température de 39° pendant 2 jours ne peut pas vraiment être une forme de grippe, puisque en général, une grippe dure entre 4 et 8 jours. Sauf s'il a un métabolisme super résistant et s'il vient de la planète Krypton.  [...]

liaison

à temperature ambiante l'ADN devient double brin (liaisons entre le brin + et -) et l'ARN tend à former des structures II.  [...] Oui, mais se sont des liaisons électrostatiques Auquel cas, la température augment simplement l'agitation thermique et donc la séparatio,  [...]