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Random priming

En cours, notre prof nous a présenté ça comme étant une technique de sélection par hybridation de gènes d'intérêts à partir d'une banque d'ADN (par exemple).  [...] Est-ce que les techniques de random priming peuvent ou non être utilisées à des fins de sélection d'un gène d'intérêt à partir d'une banque d'ADN génomique (en pratique j'entends, car n'étant pas encore dans le milieu de la recherche, je ne sais pas quelles techniques sont les plus utilisées et pour quoi parmi toutes celles vues en cours).  [...]

[Biotechnologie] Problèmes sur les notions/calculs de plasmide

Il choisit de faire pousser un certain nombre de colonoes bactériennes sélectionnées afin d'amplifier son plasmide et ainsi disposer d'une grosse quantité de son insert NIACUSE pour le séquencer et vérifier son intégrité. Il récolte les plasmides après lyse alcaline des bactéries et extraction de l'ADN au phénol/chloroforme.  [...] Donc, ici, j'obtiens 14842 pb pour plasmide + insert de la banque ADN génomique et 13361 pb pour plasmide + insert de la banque d'ADNc. Ce qui change mon résultat de la taille de l'insert génomique comparé à ton calcul.  [...]

[Biologie Cellulaire] Purification d'un récepteur membranaire

J'ai une question par rapport aux techniques pour purifier un récepteur. Dans mon cours, il est question de solubiliser par des détergents membranaires non dénaturant les protéines de la membrane puis de faire une chromatographie d'affinité pour purifier le récepteur qui nous intéresse.  [...] On utilise cette technique pour le récepteur à l'acétylcholine. Parcontre, pour le récepteur au TGF béta,on dit qu'on ne peut pas le solubiliser pour le purifier donc on fait une banque d'ADN eucaryote sinon il perd sa capacité de liaison au ligand. Ce que je ne comprends pas c'est pourquoi avec le récepteur à l'acétylcholine on ne perd pas cette capacité en le solubilisant.  [...]

[Biologie Moléculaire] aide sur la recherche d'amorce (primer) sur genbank (ncbi)

je doit commander des séquence d'ADN en vue de réalisé une reverse transcription RT-PCR sur virus de la vigne. j'ai trouvé la séquense spécifique sur la banque de gene ncbi mais le probleme est comment est ce que je doit selection les deux séquences pour faire la pcr (downstream et upstream) sachant que pour certains virus je trouve la réference du gene dans les articles qui me renvoi vers ncbi mais ne me donne pas les deux séquences.  [...] ben pour faire la RT tu n'as besoin que d'un primer, le second uniquement pour la PCR. Le choix des amorces dépend de ce que tu veux faire ensuite. de la quantification, du clonage, du séquençage, du génotypage.   [...]

[Biologie Moléculaire] Construction d'une banque d'ADNc

Pour cela nous allons suivre un procédé décrit par Bento Soares en 1994, la normalisation des banques d'ADNc par cinétique d'hybridation. (5). Cette technique se base sur le fait que, plus un ADN déterminé est présent dans une population d'ADN et plus rapidement, après dénaturation il sera ren aturé.  [...] La mise en place de cette technique nécessite l'obtention d'ADNc simple brin. Pour cela, nous transformerons des bactéries compétentes avec notre banque d'ADNc. Ensuite, nous surinfecterons ces bactéries par le phage à ADN simple brin M13K07. Nos plasmides d'ADNc contiennent l'origine de réplication de ce phage, donc, quand il se répliquera (en ADN simple brin) nos plasmides d'ADNc seront eux aussi répliqués en ADN simples brins.  [...]

[Biotechnologie] Concrètement c'est quoi une banque d'ADN

banque d'ADN, quand je vois ça j'imagine un grand institut avec des jolies baies vitrées et plein des scientifiques en blouses blanches qui viennent retirer des séquences d'ADN de leurs banque.  [...] Ca veut dire quoi qu'il faut cribler les séquences pour retrouver un gène d'intérêt Est ce que ça a un rapport avec la technique des doubles hybrides Ou celle ci n'est elle pas utilisé dans ce cadre ci.  [...]

Fabrication banque ADNc

Ce qui me gène c'est la formation d'une boucle en épingle à cheveux. Cela doit se former si il y a une séquence palindromique à l'extrémité 5' de notre ADNc, non.   [...] C'est après action de la nucléase S1 qu'on ajoute (à l'ADNc) deux sites de restrictions spécifiques du plasmide dans lequel on veut introduire l'ADNc.   [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

Sinon je veux bien connaitre tes techniques de séléction lors du criblage de banque. La seul que je conaisse est l'antibiotique.P.  [...] -pour les levure par exemple il y a aussi la sélection par auxotrophie. on fait muter les levures de sorte qu'elles deviennent auxotrophe pour par ex l'uracile Ura (elle aura besoin de celle ci pour se developper, elle ne peut pas la synthétiser elle même).  [...]

Banque d'ADN

Pour effectuer une banque d'ADNg d'un organisme, si j'ai bien compris, il suffit de mettre l'ADNg en présence d'une enzyme de restriction et de vecteurs. Nous nous retrouvons alors avec un ensemble de plasmides contenant chacun un fragment d'ADN.  [...] Pour faire des banques de gènes, il faut passer par une banque d'ADNc (extraction d'ARN puis Retro Transcription). Cette technique a par contre le désavantage de sur-représenter les gènes très exprimés dans la banque, et de posséder seulement certains patterns d'épissages (en particulier les patterns cellule-spécifiques).  [...]

Phage display et banque d'ADNc

Mais du coup, si une banque, c'est plein d'ADNc différents, on fait des protéines de fusion avec tous les ADNc différents et du coup le phage va exprimer en protéine tous ces ADNc Et après on fait la sélection.  [...] Le phage-display, c'est une méthode de criblage qui permet de selectionner un fragment d'ADN à partir des propriétés d'intéraction de la protéine qu'il code. Par exemple, dans ton cas, tu cherches un cDNA qui code pour un fragment peptidique reconnu par un anticorps spécifique.  [...]