• Forum - Technique, Fret, Transfert

Marquage GFP et autres couleurs

Bonjour cette technique s'appelle le FRET Fluorescence Resonance Energy Transfert. On utilise effectivement des fluorophores dont les spectres d'émission pour l'un et d'excitation pour l'autre se recouvrent.  [...] Mais attention cette technique repose sur un transfert d'énergie par résonnace des orbitale moléculaire des molécules et pas par fluorescence du donneur.  [...]

Test ELISA ??

Bonjour, à tous. J'ai vu un test pour tester l'action pharmacologique de medicament sur des recepteurs qui serait apparenté à un test ELISA. La technique consiste à fixer les cellules sur des palques multipuits, cellules ayant été transfectés exprimant des recepteurs tagés.  [...] Bonjour à tous, apparemment cette technique n'inspire personne Personne n'a déjà pratiqué cette technique Je pensa à une méthode Elisa sur le principe, mais on ne fixe pas les cellules comme c'est le cas ici.  [...]

PCR en temps réel

par contre je pense que tu fais une confusion (il me semble) il ya 2 techniques bien différentes. le taqman qui utilise un seule sonde qui porte le quencher et le fluorochrome on l'appelle aussi sonde d'hydrolyse car elle et hydrolysée pendant l'élongation par la taq.  [...] Il y'a en effet la méthode FRET (fluorescence resonance energie transfert ) c'est la méthode que j'ai utilisé lors de mon propre stage.  [...]

[biologie moleculaire] GFP red-shift

Quel est l'intérêt à utiliser des variantes de GFP dont le spectre d'exitation a été décalé vers le rouge. Est-ce que àa a quelque chose à voir avec le fait que l'on puisse utiliser simultanéement le DsRED et la GFP.   [...] Dans le même ordre d`idée on trouve le fameux couple CFP-YFP qui à la propriété de faire du FRET. Cette technique est tres utile pour la colocalisation de deux protéines.  [...]

[Biotechnologie] Pourquoi utiliser un FRET pour la détection d'une protéine

Le FRET ou Fluorescence Resonance Energy Transfert est un mécanisme physique qui est très appréciée en biologie. Pour faire simple, si tu excites un fluorophore avec la longueur d'onde adaptée (appelée A), il émettra en retour une autre longueur d'onde spécifique qu'on appelera B.  [...] Le FRET décrit le transfert de l'énergie du premier fluorophore à un second dans le cas où ils sont très très proches. Ainsi en émettant A, l'énergie qui devait permettre B est transférée au 2d fluorophore qui émettra alors C.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique de laboratoire en biologie moléculaire

Par contre les techniques permettant l'étude in vivo des intéractions moléculaires sont les techniques susceptibles de m'intéresser davantages. Par exemple, j'ai travaillé avec deux techniques soient l'immunoprécipitation (ChIP) et le FRET. Par contre mon chercheur connait très bien ces deux techniques alors j'en cherche d'autres question de pousser plus loin les possibilités.  [...] ça aide à caractériser des interactions. La technique du Fret que vous avez cité est pas mal non plus. Le microarray est assez long à mettre en oeuvre je trouve.  [...]

La microscopie à 2 photons et le mouvement des proteines

Ou les auteurs visualisent sans fixation le mouvement d'une protéine cytoplasmique en temps reel, grace a deux techniques de microscopie. Le FRAP et microscopie à 2 photons.  [...] En utilisant la microscopie confocale simple ou a 2 photons, on peut aussi visualiser en temps reels l'interaction de deux proteines dans une cellule au cours d'un evenement biologique (technique de FRET). Ces techniques (FRET, FRAP, FLIP...), ont revolutionne la facon de penser les processus biologiques (et tout ca, essentiellement grace a la caracterisation d'une proteine naturelle fluorescente extraite d'une meduse, la GFP).  [...]

GFP et mcherry

1) Si je comprends bien on utilise les gènes qui codent pour la GFP et la mcherry, qui seront insérés (liés au promoteur) dans un transgène, quand ceux ci seront traduits en protéines il y aura fluorescence et donc on pourra détecter si il y a eu expression de notre gène d'intérêt.. Ai je bien compris.   [...] Les couples de fluorophores comme GFP-mcherry (ou CFP-YFP par exemple), sont habituellement introduits pour faire des expériences de FRET(=transfert de fluorescence. Plus d'info ici. http.//fr.wikipedia.org/wiki/Transfe..._fluorescentes ). Ils permettent en général de voir si deux protéines (ou les deux domaines d'une meme protéine) sont proches ou non dans l'espace.  [...]

[Divers] Imagerie par fluorescence - Applications

La fluorescence est un formidable en biologie, et en médecine. C'est une technique en plein développement, elle permet la localisation subcellulaire de protéines,de quantifier l'expression des gènes, de déterminer les interactions prot/prot (FRET), ou encore de déterminer avec précision les signature calcique (apoaequorine, sonde caméléon,  [...] Le but de mes recherches à la base était de comprendre l'imagerie par fluorescence pour déterminer s'il y aurait une raison spécifique d'utiliser ces tubes IL ou non. J'ai déjà mis des posts sur la partie Physique mais comme les principaux utilisateurs de cette technique sont les Biologistes et les chercheurs en Médecine, je voulais avoir une idée plus approfondie des paramètres importants pour ce type de mesures.  [...]

[Biologie Moléculaire] Combien d'enzymes différentes dans le vivant ?

Dans ces différentes techniques, on peut ensuite utiliser des ruses pour accéder à des états moins stables, par exemple en stabilisant un intermédiaire réactionnel à l'aide d'un inhibiteur mais encore une fois il s'agira d'un instantané. Dans le meilleur des cas, on obtiendra donc une série d'images correspondant à différentes étapes et il faudra les remettre dans l'ordre et essayer de comprendre comment on passe d'une image à une autre.  [...] - Fluorescent methods. fluorescence resonance energy transfer (FRET), fluorescence correlation spectroscopy (FCS), total internal reflection fluorescence (TIRF).  [...]