• Forum - Technique, Extraction, ADN

Extraction d'ADN bactéries lactiques

Je cherche un bon protocole d'extraction de l'ADN total des bactéries lactiques. je voudrais savoir aussi par quelle technique obtient-on un bon rendement et une bonne qualité d'ADN.  [...] l'ancien protocole (lyse enzymatique) me semble très long, mais est il efficace ou l'utilisation des kits est meilleure.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ADN, ARN et protéines

Je voudrai savoir si quelqu'un connait une téchnique pour réaliser une triple extraction ADN ARN protéines.  [...] je souhaite réaliser une extraction ADN génomique sans kit. Je voudrais savoir si quelqu'un a un protocole qui marche avec une quantité de l'ordre de 50 à 100 ng d'ADN extrait pour faire une PCR ensuite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN ( ADN simple brin)

je sollicite votre aide, je suis entrain de mettre en place une technique d'extraction qui au final me donne de l'ADN simple brin... j'aimerai faire une purification sur colonne de silice, malheureusement j'ai l'impression que mon ADN n'est pas élué il reste accroché à la silice, car après avoir fait plusieurs real time en comparant ma technique avec une technique classique sur colonne de type Qiagen, les Cp sont très différent j'obtiens un Cp de l'ordre de 13 pour Qiagen et d'environ 20 pour ma technique.  [...] je pense que j'ai pas donné assez d'informations, ma technique d'extraction est différente de celle de Qiagen ( protéinase K, sels chaotropique...), en tout point, sauf que j'utilise les différentes solutions ( AW1,AW2) de la compagnie Quiagen pour les différents lavages, et je dépose mon extrait( non purifié, extraction de type alcool et sels) sur une colonne de silice pour purifier, on utilise la solution de Qiagen le AE pour l'élution.  [...]

[Biologie Moléculaire] Préparation d'un buffy coat ?!!!

j'ai entendu parler qu'ajouter du PBS avant l'extraction pouvait marcher, mais je n'en suis pas sûr (je vais tout de même essayer dès que je m'en procurerai).  [...] J'avais besoin d'aide pour la préparation d'un buffy dans le bur d'obtenir une bonne concentration d'ADN après extraction (comprise entre 25 et 50 microgrammes/200microlittres, ce qui correspond à 125-250nanogrammes/microlittres).  [...]

[Biochimie] Concentration d'un produit PCR

Cette technique sert surtout à doser la concentration après extraction. C'est souvent ce même ADN qu'ensuite on utilise en PCR, donc on le multiplie de façon exponentielle.  [...] Après extraction par kit, je tourne souvent autour de 0.3, après une dilution au 1/8 et mon éluat fait 100µl. Ca correspond donc à... 12µg si mon calcul rapide ne me trompe pas. Je dois avouer que je me suis jamais amusé à quantifier l'ADN après PCR mais on doit quand même avoir une jolie petite quantité.  [...]

inhibiteurs de la qPCR

Sachant que la qPCR sera utilisée pour quantifier le nombre de copies de gènes et que l'ADN génomique a été extrait par la méthode Salting out.  [...] Pour les autres inhibiteurs, cela va dépendre également de la méthode d'extraction utilisée (concentration en sel, résidus de solvamts,...).  [...]

[Microbiologie] Méthodes de lyse bactérienne

Il n'est pas recomandé non plus de soniquer tes echantillons si tu veux en extraire l'ADN (il est cassé en tout petit morceau). De meme, la lyse au SDS est dangeureuse si tu comptes utiliser des proteines sous forme native.  [...] j'ai jamais fait sur difficile mais sur perfringens et de nombreuse gram +. J'ai tester deux technique. Soit une lyse meca à l'amalgamateur à bille (bead bitter) soit une lyse chimique au lysozyme. Moi je fait ça pour l'extraction d'ADN et les deux méthode donne de bon rendement.  [...]

[Biochimie] La Replication de l'ADN durant l'Interphase

Des bactéries sont cultivées sur un milieu ne contenant que de l'azote léger (14N) et sont ensuite modifiés par une technique d'extraction de l'ADN et de centrification, qui permetra de trouvé la densité des bactéries de ce milieu par une lumière ultraviolette. densité de 1.710.  [...] Non, les bactéries ne sont pas modifiées, simplement on extrait leur ADN et c'est lui qu'on soumet à une ultra-centrifugation (en fait c'est une ultra-centrifugation dans une solution contenant un gradient de césium, mais c'est un détail à ton niveau). Donc on parle de la densité de l'ADN, pas des bactéries.  [...]

[Divers] L'extraction d'ADN

Je fais mon TPE sur la police scientifique, et l'ADN. Pour cela, j'aurai aimer savoir comment la police scientifique extraie-t-elle l'ADN. Si elle utilise des techniques particulières.  [...] - l'extraction différentielle. il s'agit ici de séparer de l'ADN provenant de deux fractions différentes. Exemple le plus courant. mélange de cellules épithéliales (fraction féminine) et de spermatozoïdes (fraction masculine) que l'on peut retrouver sur des prélèvements de type préservatifs, écouvillons vaginaux.  [...]

[Biochimie] TPE sur l'ADN

- le deuxième type d'extraction est l'extraction différentielle. il s'agit ici de séparer de l'ADN provenant de deux fractions différentes. Exemple le plus courant. mélange de cellules épithéliales (fraction féminine) et de spermatozoïdes (fraction masculine) que l'on peut retrouver sur des prélèvements de type préservatifs, écouvillons vaginaux.  [...] La technique est légèrement différente des précédentes avec l'emploi notemment de DTT pour séparer correctement les deux fractions.  [...]