• Forum - Taux, Protéine, Intérêt

[Biologie Moléculaire] transfection lipofectamine LTX and PLUS reagent invitrogene

Avant tout, une question peut-être bête mais je ne connais pas bien les gènes que tu étudies. Ta mort cellulaire n'est-elle pas justement dûe à la surexpression des protéines que tu veux étudier.  [...] Si possible, essaie de faire cette optimisation avec des plasmides ne codant que pour le fluorophore (sans ta protéine d'intérêt), si tu en as, et vois par la suite avec tes plasmides d'intérêt si tu retrouves le même taux de transfection.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Ce que je sous-entends c'est. peut etre que ton ligand induit une augmentation de la quantité du messager (en jouant sur sa synthèse ou sa stabilité (voir premier point) mais également une dégradation rapide de la protéine ce qui fait que tu ne peux plus la détecter. As-tu tenté de bloquer le protéasome.  [...] Je viens de parcourir le topic rapidement. Au vu des différentes réactions que tu as (taux d'ARN augmenté, IHC OK et WB rien), ilo me semble que cela vienne de la dénaturation de ta protéine en WB. Ton anticorps primaire est-il un anticorps dirigé contre la séquence de ta protéine d'intérêt ou un anticorps séquentiel.  [...]

Antigène

càd synthétiser des protéines recombinantes, dans le cas où l'antigène est protéique et je pense que c'est le cas le plus souvent.  [...] Les protéines recombinantes ne sont donc pas extraite de la nature mais synthétisées en laboratoire. Pour te donner un exemple que j'ai expérimenté, moi en thèse je travaillais sur la protéine d'un parasite très pénible à cultiver. J'aurais jamais pu cultiver assez de parasites pour ensuite faire 50 étapes d'extraction/purification pour arriver à un excellent taux en ma protéine d'intérêt dans mon échantillon, et en quantités acceptables pour mes manips.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

En y réfléchissant bien y a quand même plusieurs raisons qui font que l'on veuille faire exprimer une protéine par une cellule sans pour autant faire de la transgénèse.  [...] Le fait qu'on utilise un promoteur viral est car ces promoteurs sont des promoteurs dit fort, permettant de bien surexprimer la protéine d'interêt, par un fort taux de transcription.  [...]

[Biologie végétale] Symbiose Fabacées-Bactéries nitrifiantes

La symbiose entre les Fabacées et une certaine famille(je crois que c'est le bon terme, je suis pas sûr) de bactéries nitrifiantes, les rhizobiums, est une symbiose très étroite. Les deux organismes doivent cohabiter pour fabriquer de la leghémoglobine. Pour la bactérie, je vois facilement l'intérêt, la leghémoglobine servant à contrôler le taux d'oxygène, ce dernier détruisant les complexes Fe-Mo qui lui sont nécessaires à la fixation de l'azote, mais en qui cette protéine est nécessaire.  [...] Absolument pas, l'intérêt pour la plante est de récupérer l'azote fixé par Rhizobium. La léghémoglobine lui permet d' optimiser le travail de la bactérie.  [...]

fusion transcriptionnelle et traductionnelle

la fusion traductionnelle est une fusion de gênes effectuée dans leur partie codante et respectant les cadres de lectures. Permet d'obtenir une protéine chimère. cette technique permet par exemple de faire une fusion entre un gène d'intérêt ( qui code pour une protéine d'intérêt ) et le gène qui code pour la GFP.  [...] à propos d'une fusion traductionnelle, j'imagine qu'on peut l'utiliser pour isoler une protéine d'intérêt ou bien réaliser une fusion entre une protéine d'intérêt et la GFP ( pour visualiser et localiser le chemin emprunté par la protéine dans la cellule ) je me trompe.  [...]

[Biochimie] Petite question sur le Western Blot

Une autre cellule traitée avec notre produit contient 1ug de notre protéine A d'interêt mais aussi, 3 ug de protéines B car notre composé a boosté la synthèse d'une protéine B.  [...] Quand j'aurai le résulat de mon WB, je me dirais que mon composé testé à diminué la synthèse de ma protéine A d'interêt...alors qu'en fait ce n'est pas le cas, le composé a favorisé la synthèse d'une autre protéine.  [...]

[Biotechnologie] proteine recombinante d'interet médical

tout d'abord, il faut d'isoler le gène d'intérêt (mais dans ce cas faudrait le synthétiser non), codant pour la protéine recherchée.  [...] ensuite introduire la molécule d'ADN (vecteur + gène d'intérêt) dans une cellule hôte, qui exécute les instructions qui lui sont fournies par le gène d'intérêt, et réalise les modifications post-traductionnelles (les 3 ponts disulfures et la glycocylation à 15 %) dans l'objectif de fabriquer la protéine recherchée. L'hôte sera donc par exemple des cellules CHO.  [...]

[Biochimie] Différence western blot / immunoprécipitation

Certes, mais le gros intérêt de la technique est qu'une fois la protéine d'intérêt précipitée, on peut révéler des protéines qui interagissent potentiellement avec elle puisqu'elles auront été entraînées également. Et ça on ne peut le faire en wb.  [...] Du coup cette raison me semble valable et j'y avais pensé, c'est mieux d'avoir la seule protéine sur la membrane plutôt que toutes les autres avec, même si l'anticorps n'est censé révéler que la protéine d'intérêt.  [...]

Les lymphocytes T4 - Page 2

Je redemande quel en est l'intérêt vu qu'on peut être infecté par le virus et avoir un taux normal et ne pas être infecté par le virus et avoir un taux anormal et enfin avoir un taux qui sorte des normes sans qu'il y ait de problème.  [...] Le seul test de dépistage au VIH qui est valable, c'est la sérologie VIH visant à détecter/doser les anticorps anti-VIH, (puis il y a une confirmation de présence de la protéine virale gp120, je crois) qui sont forcément produits par l'organisme après 6/8 semaines post-infection.  [...]