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[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Est ce qu'il y a un rapport entre la quantité d'ADN que l'on transfecte et le taux de protéine exprimé au sein des cellules.  [...] Ca me paraît difficile de faire une règle générale. Ca doit déjà dépendre de ce que tu appelles ADN (un plasmide j'imagine), du promoteur, des conditions... Je pense que la seule façon de le savoir est d'essayer.   [...]

[Biochimie] Dosage proteine totale sur FHN

J'evalue l'activité de certaine molécules sur deux type de cellules, les FHN et les HaCAT. Pour evaluer cette activité je fais un dosage BCA sur les culots cellulaire pour determiner le taux de proteine totale.  [...] Sur les Hacat la coloration se réalise au maximum en 20mn alors que sur les FHN la coloration se fait en minimum en 2h30mn. Tout d'abord j'aurais voulu savoir si pour certain d'entre vous le constat etait le même. Ensuite j'aurai voulu savoir si ajouter une faible dose de soude pour eclater les membranes et donc acceler la coloration etait une bonne solution.   [...]

Pureté de l'ADN / efficacité d'expression

Certains d'entre vous ont ils déjà constaté que la pureté de l'ADN au départ pouvait affecter la capacité des cellules, ensuite, à exprimer *correctement* les protéines Je ne parle pas ici de taux de transfection, qui est bon, ce que m'indique la GFP co-transfectée par exemple.  [...] pour ce qui est de la pureté de ton ADN pour les transfections, si tu tourne autour de 1,6-1,7 c'est vraiment bien. Pour être honnête, moi j'avais une prép de plasmide qui tournait plutôt autour des 1,4-1,5 et mes transfections sur cellules marchaient très bien, y compris le taux d'expression de la protéine qui convenait pour mon type de manip.  [...]

[Biologie Moléculaire] augmentation du taux d'ARN mais non celui de la protéine

Je ne l'ai jamais fais donc je ne sais pas si ca fonctionne bien mais une astuce pour faire le tri serait d'utiliser un ARNi/morpholino antisens à ton ARNm pour faire un IHC sur tes cellules mutantes pour ta protéine. Le contrôle d'inhibition de l'expression de l'ARN endogène serait un northern ou une qPCR.  [...] Je maintiens qu'il doit y en avoir un des deux qui foire quelque part. Si vous enleviez l'IHC on serait ok. Mais le problème c'est qu'elle est là. L'honneté oblige d'en tenir compte. Du coup la question qui se pose est. est ce que ce qu'elle observe en IHC n'est pas un artéfact La seule solution que je connaisse pour tester un anticorps c'est de faire la manip' sur une cellule/tissu n'exprimant pas la protéine cible.  [...]

vaccination

Le but du premier vaccin est de créer des lymphocytes mémoires avec un taux suffisamment élevé un taux protecteur sauf qu'avec le temps, ces cellules dégénèrent d'où la nécessité de faire un rappel qui augmentera le taux des cellules mémoires. Parce que les 2 buts du vaccin en fin de compte c'est d'avoir des cellules mémoires ET un taux protecteur.  [...] - Ta première injection va stimuler ton système immunitaire, il va y avoir une première différenciation qui sera celle des lymphocytes T. Certains de ces derniers vont pouvoir stimuler les lymphocytes B. Ces derniers vont alors se différencier, certains seront des lymphocytes mémoires et d'autres seront des plasmocytes, producteurs d'anticorps.   [...]

Muc1

MUC1 est une glycoproteines de la familles des mucines,,, et elle à un taux elevé dans les cellules canceruse,, certain livres disent quelle intervient dans l'anti-adhesion. plus y'en à,,, moins les cellules adhères,,,, donc ma questions,,, quelle est le substrat ou le support sue le quelle MUC1 adhère le mieux.  [...] Re-merci bcp pour toute les infos,,, c'est vrai que j'ai seulement 19 ans,,, mais ce projet est Mon bilan de compétences expirementales,,, en faite,, j'ai choisit le thème des glycoproteines,, et j'ai essayé entre-autres de commencer à monter mon projet a propos de MUC1,,, j'avoue que je ne suis pas encore familliarisé avec toute les technique de labo,,, donc je sais pas trop si je pourrai arriver a exprimer MUC1 dans les CHO,,, neanmoins,, je pourrais tjr travailler sur mes cellules normales,, et voir dans differents cas l'état d'adhesion des cellules,,,  [...]

[Biologie Cellulaire] petite question sur les méristémes

Mais la présence d'azote atmosphérique ne peut pas influencer la synthèse de protéine vue que les plantes (et la plupart des organisme) ne savant pas utiliser l'azote atmosphérique. seules quelques bactéries savent fixer l'azote de l'air sous forme assimilable par la plante.  [...] Je disais simplement que le taux d'azote atmosphèrique ne peux pas influencer directement la synthèse de protéine au niveau du méristème vue qu'il n'est pas biodisponible pour les cellule.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Pour les techniques de marquage métabolique ou de western, les questions ne sont pas du tout les mêmes. L'un permet d'estimer la quantité de protéine synthétisée (attention aux protéines instables et rapidement dégradée), l'autre c'est la quantité de protéines présente à un temps donné (néosynthèse ou pas, dégradation ou pas).  [...] Enfin pour le marquage métabolique, je ne supprime pas le biais de la stabilité de la proteine c'est vrai, mais je ne mesure plus que les proteine traduites pendant un temps donné et non pas la quantité totale dans la cellule. Si j'inactive le protéasome je peux optimiser ma mesure c'est cool ça.  [...]

[Biochimie] augmentation du taux de la protéine Tamm-Horsfall dans l'urine

[Biochimie] augmentation du taux de la protéine Tamm-Horsfall dans l'urine.  [...] immunologiques et participe aux échanges hydro-électrolytiques entre la lumière et l'épithélium tubulaire de la portion distale des néphrons et qu'elle inhibe l'agrégation des cristaux d'oxalate de.  [...]

[Biochimie] Complexe Hypotalamo hypophysaire

voila mon problème, les cellule de Sertoli s'écrête une hormone que l'on appelle l'inibine celle ci exerce un rétro controle négatif au niveau de l'hypotalamus est plus précissement au niveau des neurones qui s'ecrete une proteine appellé GnRH. Cependant on dit que quand le taux d'inibine et faible il y à une déficience de la spermatogénese il y à alors rétro controle négatif mais pourquoi NEGATIF et pas positif puisque le taux de GnRH doit augmenter tout comme la FSH pour donc stimuler la spermatogenèse.  [...] d'accord merci. c'est pour cela donc que l'on ne parle pas de rétro controle positif chez l'homme. Les cellules de Sertoli fabrique également un proteine l ABP je ne comprend pas sont role.  [...]