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[Divers] Calculs de Labo

ps. je crois que calculs de paillasse ne veut rien dire...on va dire que cela se rapproche de la chimie des solutions sans en être pour autant.   [...] La biochimie est une mine de calcul en tout genre, dillution, conversion de masse en concentration, calcul des pka pour les tampons.  [...]

Saturation BSA pour purif de protéine His-tagged

Si c'est vraiment une liaison aspecifique a ta colone, ta seule solution est d'augmenter la concentration saline de tes tampons pour diminuer cette interaction.  [...] Pour les tampons, on en utilise 2 avec pour un du béta mercapto et pour l'autre de l'imidazole (entre autre)...ça doit quand même bien décaper et l'imidazole est sensé diminuer l'aspécificité.  [...]

Où trouver des protéines ?

Mais de toutes façons, la variation d'ions bicarbonates est nettement plus influencée par la respiration que par l'alimentation (ça n'a même aucune mesure) puisque le CO2 respiratoire (métabolisme aérobie) se combine avec l'eau pour donner l'acide carbonique donc si on doit accorder une importance à ce sujet, ce n'est pas l'alimentation qui doit être surveillée en priorité (d'ailleurs, au sujet des protéines, il ne faut pas oublier que c'est un des principaux système tampon intracellulaire).  [...] Pour l'avoir expérimenté plus souvent de façon involontaire que volontaire - mais volontaire aussi pour déterminer s'il s'agit d'un facteur migrainogène (bingo...) - manger hypoprotéique sur une période de 24h ou plus, ça peut jouer du simple au centuple sur le ressenti proprioceptif.  [...]

extraction ADN

je fait de l'extraction d'ADN avec TE, lysozyme, SDS, isopropanol et éthanol mais j'obtiens un ADN pas très propre (. 1 au spectro). on m'a dit de rajouter une étape avec le chloroforme mais celui nécessite une hotte chimique ce qu'on a pas. je voulais donc savoir par quoi on pourrai le remplacer.   [...] par contre tu as un autre protocole, pas cher et inspiré des kits. la lyse alcaline, l'idée étant de récupérer du tampon P1 en trop dans les kits de midiprep ou maxiprep.  [...]

[Biochimie] Les mystères de la PCR

Je m'explique. Je fais des PCR régulièrement pour génotyper des souris. Jusqu'à lundi, je n'avais aucun problème et là, boum, pas de bandes sur mon gel d'agarose. Au final, je me rend compte que je me suis bêtement trompé de concentration de dNTPs. En fait j'en ai mis trop (problème de solution mère faite un lundi trop tôt.   [...] dans mon labo il ne rajoute jamais de MgCl2 et nous avons que des smears ou rien lors de nos pcr, c'est possible que sa vienne de cela le problème c'est que sur les memes échantillons tout marché super bien avant.   [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Quand tu modifies ton adn avec des enzymes les tampons d'activité contiennent souvent des produits qui pourrissent la migration, c'est surement ça.  [...] Je suis d'accord avec Mantos, soit tu as une concentration en sels trop importante, soit c'est que tu as dans ton tampon d'élution de ta colone des traces plus ou moins importantes de ta solution de lavage de la colone. Ca se produit notamment quand apres les lavages tu ne prends pas soint d'éliminer toute trace de liquide entre le tube collecteur et la colone.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Pour l'extraction d'ARN, la contamination vient bien du fait que j'ai utilisé du tissu congelé (jeté dans le tampon RLT à 20°C). Le commercial m'a conseillé de chauffer les échantillons juste 5 min à 30°C après broyage puis de bien vortexer pour dissoudre les sels.  [...] Concernant les protéine j'ai eu un gros culot donc ça a l'air de marcher mais j'ai pas encore pu faire de quantification parce que mon kit de dosage n'est pas adapté (il interfère avec mon tampon de reprise). J'attends un kit de dosage approprié d'ici peu puis je les ferai migrer pour voir la tête qu'elles ont.  [...]

Intégration dans un plasmide

Mais en routine, dans les labos, on fait ça In vitro car c'est très bien huilé, les tampons, temps d'incubation etc sont optimisés par les compagnies qui vendent ces produits... ça marche très bien.  [...] Pour les integron, oui c'est trés connu comme systeme mais pas utilisé comme tel (enfin je pense) comme outil de biologie moleculaire pour faire du clonage ou autre. Certaines methode (Datsenko & wanner) utilisent par contre une integrase pour augmenter la frequence de recombinaison homologue d'un gene dans un genome (mais la on s'eloigne de ta question).  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Le kit utilisé permet simplement de montrer l'action des enzymes de restriction aux élèves de terminales S. L'alimentation utilisée est, selon le fournisseur, étudiée spécialement pour réaliser ce type de gels. J'imagine donc que c'est un problème de tampon.  [...] Je suis d'accord avec Annaick_R. Essaye du tampon 1x ou 0.5x avec une concentration d'agarose de 0.8% sur un petit gel, voir même 0.6% comme dit plus haut. Ton kit de lambda digéré c'est un vecteur c'est bien ça Donc s'il est digéré tu devrais voir une bande assez haut sur ton gel (dans les 2kb environ) et tu peux laisser migrer moins longtemps.  [...]

Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.  [...] Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -. mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire le noyau devient tout petit et finit par éclater aussi.  [...]