• Forum - Tampon, Réaction, Enzyme

[Biochimie] dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

1- Pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace (4C°). Pour quoi broyer le tissus+tampon dans la glace Pour quoi le centrifuger à (4C°) Après la centrifugation, est ce qu'on doit remettre le tube dans le froid, jusqu'à la provocation de la réaction dans l'étuve du spectrophotomètre.  [...] Soit on veut empêcher que l'enzyme soit active durant la phase de préparation (car ainsi il n'y a aucun produit de formé, toute l'activité que tu verras par augmentation de l'absorbance sera du à des réaction se produisant à ce moment là), soit il y a d'autres enzymes ou inhibiteurs de ton enzyme dans l'échantillon qui pourrait dégrader ton enzyme d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Des PCR qui n'ont rien à voir ont été faites pour tester l'enzyme (Phusion), le tampon de l'enzyme, l'eau et les dNTP, tout a très bien fonctionné.  [...] Votre séquence est elle riche en GC, en structure secondaire car en plus de la taille de l'amplicon, cela peut aussi expliquer le fait que les enzymes décrochent de l'ADN.  [...]

[Biochimie] Centrifugeuse différentes vitesses

Pour faire le dosage d'une enzyme la catalase, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 9000 g pour avoir la fraction mitochondriale (contient les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes).  [...] Pour faire le dosage d'une protéine Métalothionine, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 30000 g pour avoir la fraction microsomale (contient les rybosomes et les réticulums endoplasmiques).  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Le kit utilisé permet simplement de montrer l'action des enzymes de restriction aux élèves de terminales S. L'alimentation utilisée est, selon le fournisseur, étudiée spécialement pour réaliser ce type de gels. J'imagine donc que c'est un problème de tampon.  [...] Merci pour tous ses renseignements. J'ai fait un nouvel essai. nouveau tampon dilué 10X, nouveau gel à 0.8%, mais cette fois-ci j'ai inséré un rhéostat pour limiter le courant... Une heure de migration et le résultat était plutôt bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Quand tu modifies ton adn avec des enzymes les tampons d'activité contiennent souvent des produits qui pourrissent la migration, c'est surement ça.  [...] Non effectivement apres une restriction enzymatique je ne repurifie pas c'est vrai et le second gel proviens d'une restriction.  [...]

Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.  [...] Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -. mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire le noyau devient tout petit et finit par éclater aussi.  [...]

[Biochimie] Protocole de TP un peu flou

J'ai un tp de biochimie la semaine prochaine,je suis en train de le preparer j'ai compris le but qui est de tracer des spectres d'absorption de 3 acides aminés pour etablir leur coefficient.   [...] Reviendrai à. Prélever 2ml de la solution de Phe, puis l'introduire dans une fiole jaugée de 10ml et de compléter le volume jusqu'au trait de jauge avec la solution de tampon phosphate.  [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

Certaines boites vendent des gels d'AA prêt à l'emploie, notamment pour tout ce qui est gel à gradients mais cela ne s'adresse pas aux élèves du secondaire ni aux étudiants en fac et reste plutôt réservé à la recherche. Sinon il est relativement simple de les couler soit même à condition d'avoir le matériel et les différents tampons.  [...] Vous placez des bandes d'acétate dans un tampon tri-véronal (200 ml pour trois bandes) pendant 10 à 20 minutes puis vous essorez l'excès de tampon en plaçant les bandes entre deux feuilles d epapier absorbant.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.  [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Y a-t-il une différence entre laisser incuber son anticorps 1aire pendant 2h et overnight Est-ce que le signal s'emplifie en fonction du temps d'incubation avec l'anticoprs corps, ou bien est-ce que c'est une réaction qui a lieu au bout d'un certain temps (notamment 2h) et qui s'arrête ensuite.  [...] Est-ce que le signal s'emplifie en fonction du temps d'incubation avec l'anticoprs corps, ou bien est-ce que c'est une réaction qui a lieu au bout d'un certain temps (notamment 2h) et qui s'arrête ensuite.  [...]