• Forum - Tampon, Protéine, Dialyse

[Biologie Moléculaire] WB, GFP et imageur fluo

- Soit effectuer une renaturation de la protéine (dialyse contre un tampon non dénaturant.  [...] - soit faire un gel non énaturant, mais la il risque d'etre difficile d'évaluer la taille des protéines, celles-ci ne migrant plus en fonction de leur poid moléculaire.  [...]

[Biochimie] purification proteines

Voila j'ai une question qui m'est venue à l'esprit. pourquoi utilise t-on du beta-mercaptoethanol dans le tampon d'elution d'une proteine et dans le tampon de dialyse. Je pensais que le beta-mercaptoethanol etait une reducteur qui denaturait la proteine donc à la fin de la purif la proteine devrait donc être inactive.  [...]

[Biochimie] Sollution tampon votre avis

Le tanpon que tu souhaites utiliser est un tampon d'extraction donc pour moi le plus important c'est qu'il te permettes d'extraite ta protéine avec un rendement maximal et tout en gardant l'activité de ta protréine. La composition que tu as donné me parait classique.  [...] Ensuite concernant ta seconde question. Difficile a répondre sans connaitre ton protocole expérimental (composition tampon, volume tp vs volume extrait enzymatique,...). Peux tu me donner quelques élements de réponses si ce n'ai pas trop confidentiel Mais sache qu'il existe des méthodes pour changer de tampon après ton extraction pour conditionner ta protéine dans un autre tampon... (Dialyse, unité de concentration,...).  [...]

[Biochimie] tris-HCL

Bonjour, votre discussion m'intéresse tout particulièrement. Lorsque je purifie une protéine, il est donc conseillé de la placer en tampon TGED. Mais pour certaines manips, lors de l'étude de la protéine, le glycérol va gêner. Il faudrait donc une étape supplémentaire d'ultrafilatration/dialyse pour éliminer le glycérol comemnt procédez-vosu d'ordinaire.  [...] Generalement je concentre ma proteine et change le tampon directement apres elution par centrifugation sur colonne (microcon ou autre). Je m'arrange aussi pour concentrer ma proteine au minimum 100x. Comme ca quand j'ai au max 0.5% de glycerol final.  [...]

[Biochimie] Etapes de la purification d'une protéine acide

On nous demande d'expliquer l'intérêt de chaque étape de purification d'une protéine principalement détectée dans la fraction membranaire brute des cellules (probablement localisée dans les membranes lysosomales), et voici les étapes.  [...] Peut être pourriez vous nous décrire vos idées par rapport à l'intérêt de chacune de ces étapes, et plus précisément où vous bloquez, pour ne pas donner l'impression aux modérateurs (et davantage) de vouloir qu'on fasse l'exercice à votre place.   [...]

[Biochimie] Purification d'une proteine acide

J'espère que ce n'est pas trop tard, surtout que je n'apporte pas vraiment de réponse, juste une partie d'un cours sur la dialyse qui pourra peut etre s'integrer dans ton processus de purif.  [...] Cela concerne la renaturation des protéines. Par dialyse ou dilution, on peut éliminer progressivement le dénaturant, en exposant la protéine a des concentrations intermédiaires de denaturant. Et au final, a des concentrations intermédiaires, les intermédiaires de repliement sont susceptible de précipiter.  [...]

[Biochimie] Qu'est-ce qu'un sac à dyalise ?

Ben simplement, un sac à dialyse c'est un sac particulier qu'on utilise en laboratoire pour faire des dialyses... On y inserre notre solution protéique, on ferme et on met le tout sous agitation dans un grand volume de tampon de dialyse.  [...] Pour augmenter la pureté de notre protéine au sein de notre extrait, on prend donc une membrane de dialyse dont la porosité est inférieure à la taille de la protéine, par exemple une porosité de 150 kDa. Ainsi, les molécules de taille inférieure à la porosité passeront au travers de la membrane et équilibreront les deux compartiments.  [...]

[Biochimie] dialyse

Pour expliquer simplement, ça permet de remplacer le tampon initial par le tampon que tu veux. C'est souvent utiliser pour enlever les sels d'un tampon (on les diluent a un niveau ou il ne risquent pas d'interférer avec la suite des expériences pour être plus exact).  [...] Sinon la membrane utilisée est poreuse et laisse donc passer les molécules inférieures a un certain poids (dépendant de la membrane utilisée) tout en gardant les protéines a l'intérieur de la membrane.  [...]

[Biochimie] Purification sur colonne et EDTA

Au labo, les purifications de protéines sont réalisées sur colonne de nickel et malgré l'étape de dialyse, il arrive régulièrement qu'il reste un peu d'EDTA (présent dans le tampon d'extraction), ce qui détruit la colonne.  [...] Peut-on titrer l'EDTA présent dans l'extrait protéique après dialyse et avant passage sur la colonne (sans utiliser tout l'extrait protéique bien sûr).  [...]

[Biochimie] Principe de la dialyse

La question 2 est plutôt orientée dans le sens mécanisme de la dialyse, c'est à dire que ce passe t-il au niveau des electrolytes (rôle de la membrane, principe de la diffusion etc...).  [...] Le tampon de dialyse ne contient pas le soluté au début de la dialyse, à l'équilibre les concentrations internes et externes sont égales. En utilisant un grand volume du tampon de dialyse et en le renouvelant la concentration du soluté dans le sac diminue et finie par être négligeable et le soluté est ainsi éliminé par exemple d'un extrait protéique.  [...]