• Forum - Tampon, Migration, Concentration

Sds-page

Je suis en BTS et en stage j'effectue des Western Blot. Dans cette technique j'utilise du SDS (Sodium dodécyl sulfate) dans le tampon de migration et dans les gels de concentration et de migration.  [...] Et pour ce qui est d'utiliser du SDS à la fois dans les gels et dans le tampon de migration, pensez vous que cela interviens dans la concentration finale du SDS et donc de son rôle pourquoi ne pas en mettre que dans le tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] TBE et gel de migration

si je prépare 100µl d'un gel d'agarose à 1% et du TBE 1X est ce que la concentration du tampon influ sur la qualité du gel et inverssement.  [...] Tu ne coules pas ton gel dans le tampon de migration, donc non, il n'y a pas d'effet de l'un sur l'autre. Les paramètres de concentration de ton gel et ceux de ton tampon vont par contre influencer la migration tous les deux.  [...]

les gels de compression et de sépartion

Pourquoi utilise-t-on un tampon tris avec des pH différents pour les gels de compression et de séparation en western blot.  [...] La différence de pH permet une vitesse de migration différente, une migration plus lente permet l'entrée dans le gel et la concentration des protéines. L'effet est lié au pI de la glycine du tampon de migration.  [...]

Problèmes PCR

tu as probablement un probleme de concentration en sels dans ton gel ou dans ton tampon de migration. es tu sure de ne pas avoir utilisée du TBE/TAE 10X au lieu du 1X.  [...] C'est en effet ca. tu as utilisé la meme solution pour preparer ton gel et pour faire la migration qu'elle est la concentration en agarose de ton gel et enfin qu'elle est la taille attendue de tes PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Electrophorèse (ADN sur Agarose) et Bromure d'éthidium

J'y avais vaguement pensé, le truc c'est que je n'ai jamais vu mes fragments de petite taille dans un gel lorsque je fais migrer des restrictions. Et ce n'est pas une question de concentration en agarose seulement. L'idée que j'avais derrière la tête (ou dedans, c'est selon ), c'est que les petits migrent trop vite comparé aux grands, donc je me disais que, BET ou pas dans ton TAE de migration, les petits risquent de sortir avant que de correctement séparer les grands. C'est pour ça que j'insistais autant.  [...] J'y avais vaguement pensé, le truc c'est que je n'ai jamais vu mes fragments de petite taille dans un gel lorsque je fais migrer des restrictions. Et ce n'est pas une question de concentration en agarose seulement. L'idée que j'avais derrière la tête (ou dedans, c'est selon ), c'est que les petits migrent trop vite comparé aux grands, donc je me disais que, BET ou pas dans ton TAE de migration, les petits risquent de sortir avant que de correctement séparer les grands.  [...]

[Biochimie] migration sds page

je viens de recommencer un gel en diminuant la concentration en glycérol, en prenant de nouveaux produits (acrylamide, tampons avec le bon pH, b-mercaptoéthanol...). La migration est un peu meilleur mais mes protéines ne dépassent toujours pas la moitié de mon gel de séparation alors que mes marqueurs et mon front de migration sont OK.  [...] Je viens de penser a autre chose. Quand tu fais le tampon de migration. Est ce que tu vérifies sont pH Normalement avec la recette il doit être au bon pH sans que tu ai à l'ajuster, sinon il y a un problème. Mais si tu l'ajustes quand même alors fait le avec du tris concentré (Tris-Hcl ou Tris-Base selon le cas) c'est mieux que de le faire avec du Hcl.  [...]

[Biochimie] Chromatographie d'exclusion

Conseil. le gel c'est des petit billes, elle coulent mais au moindre mouvement de l'eau elles bougerons. Donc pour éviter ça au maximum pendant la migration (après le dépos) met 3 ou 4 cm de tampon en réserve au dessus du gel. Comme ça quand tu en rajoutera ça brassera moins le gel que si le niveau de tampon est a raz (tu me suis).  [...] Pour résumer tu ouvre le robinet pour faire descendre le niveau du tampon a raz le gel quand tu va faire ton dépôt et quand tu fait ta migration.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot flou

C'est bizzare. Quand je fais un petit gel à 10 %, il migre à 100 V 2 H maxi. Le problème vient peut-être du tampon trop faible en ions (vérifie les concentrations ainsi que les réactifs stocks) et peut-être aussi de ta cuve. Si les bandes sont floues c'est plus un problème de migration que de transfert je pense.  [...] de toute manière dés lundi j'ai prévu de refaire toutes les solutions on ne sait jamais. ce sont des solutions stocks préparéés à chaque fois par un membre du labo donc on ne sait jamais surtout qu'on vient de me signaler un doute sur le tampon de migration préparé par 2 personnes différentes (donc y a déjà un doute).  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] Je viens de refaire un gel avec des tampons d'une collègue ainsi que son tampon de charge qui fonctionnent très bien ensemble. Mais visiblement dans mes mains non. J'ai toujours un front de migration flou et des bandes de protéines pas très nettes... *PAN*.  [...]

Solution tampon électrophorèse

L'électrophorèse consiste à faire migrer des molécules grâce à un courant électrique qui va traverser le gel (d'agarose ou de polyacrylamide par ex) qui contient tes échantillons. Il te faut forcément quelque chose pour conduire ce courant. il s'agit de la solution tampon, qu'on appelle aussi tampon de migration.  [...] En général, la solution tampon va non seulement permettre de maintenir le pH à une valeur donnée mais aussi de stabiliser les charges, de façon à ce que tes molécules soient regroupées sur base de leur poids et de leur charge. si une molécule comme l'ADN chargée négativement était mise dans une solution sans tampon, elle s'accaparerait des protons de ta solution et la migration en se ferait pas aussi bien.  [...]