• Forum - Tampon, Kit, Extraction

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]

tampon ATL QIAGEN

Secret commercial non, sérieusement, Qiagen (et autres) n'ont aucun intérêt à donner la formulation exact de leur tampon. Tu peux parfois avoir des indications (comme le type de sel utilisé pour le pouvoir tampon) mais c'est tout. C'est bien sur pour éviter que tu en fasses toi même et que tu achètes chez eux le kit complet (même si tu n'as besoin que du tampon). C'est beau le commerce.  [...] Cependant, si tu as des problèmes pour l'extraction ou autres étapes, tu peux demander conseils par mail (lent) ou téléphone (rapide, ou pas) à leur service technique (ils sont gentils, ils ne mordent pas ).  [...]

[Biochimie] migration sds page

alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...] je ne connais pas le kit d'extraction que tu utilises mais est ce que ça ne serais pas plutôt lui qui est pourri. Je veux dire, pour une raison ou une autre (trop vieux, pas bonnes conditions de stockage...) est ce que le pH des tampons de ton kit n'aurait pas varié, ou il n'y aurait-il pas eu précipitation ou concentration (du a une évaporation) en sel (je parle toujours des tampons).  [...]

[Biologie Moléculaire] traitement à la DNase inefficace...

dans mes manips d'extraction et purification d'ARNm, j'ai un problème de contamination d'ADN génomique dans ma solution purifiée.  [...] Extraction avec le kit de purification Picopure Arcturus, avec un extraction buffer, puis sur colonne Picopure. Ils proposent de faire un traitement de DNAse Qiagen directement sur la colonne (10µl de DNase + 30 µl de tampon RDD (tampon de l'enzyme).  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de l'adn

J'ai extrait de l'ADN génomique bactérien, mais je me pose la question de la durée que je peux le conserver (c'est pour faire des PCR ensuite).   [...] Selon vous, combien de temps ces ADN peuvent être conservés dans un bon état, à -20°C, à 4°C Sachant que les ADN bruts sont dans le tampon d'élution du kit d'extraction, et les ADN dilués dans de l'eau DNase-RNase Free.  [...]

pb dépots echantillons d'ARN

Après avoir réaliser une extraction d'ARN de bacteries issue de l'eau avec un kit QIAGEN, je dépose mes échantillons avec du bleu de dépot pour ARN et là se produit une chose pas courante. Au lieu de que mon échantillon se retrouve au fond de mon puit (gel 2,5% agarose et tampon TE 1X tout a fait normal), celui ci se voit revenir à la surface et se dissipe dd'un coup dans mon gel.  [...] D'autant que pour les extractions d'ARN les protocoles conseillent de ne pas laisser evaporer l'alcool avant la resuspension finale de l'ARN.  [...]

Extraction d'ADN

Notre laboratoire travaille entre autre sur de l'extraction d'ADN issu de valves cardiaques de patients. Nous utilisons pour ca le kit Qiagen (attention, il existe des kits d'extraction d'ARN et d'ADN). Je crois ne pas me tromper en disant qu'il existe plusieurs kit pour l'ADN.  [...] Renseigne toi sur le site de Qiagen a savoir s'ils ont un kit micro. Si tu es limité sur la quantité d'échantillon, il vaut mieux opter pour le kit d'extraction le plus petit possible (donc kit mini si le kit micro n'existe pas).  [...]

[Biologie Moléculaire] Qiagen RNeasy trizol

J'utilise pour mes extractions d'ARN les colonnes RNeasy du kit Mini de qiagen, après lyse dans leur tampon RLT. Ce kit est prévu pour des petites quantités de matériel.  [...] Je confirme, en ce qui me concerne l'extraction au Trizol a toujours fonctionné même en changeant de tissus (j'ai travaillé sur des tissus d'animaux, plantes et champignons...) sachant que j'avais pas recours à des kit et j'arrive à visualiser des RNA nickels.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ARN

Avec les kits disponibles aujourd'hui c'est possible d'avoir assez d'ARN pour bosser à partir de très peu de cellules, renseignes toi chez les fournisseurs habituels de ce type de kit d'extraction.  [...] Ca coute un peu cher mais les kits d'extraction spécialement concus pour petite quantité d'arn sont la meilleure solution dans ton cas à mon avis.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clone sans ADN

Lors de l'extraction d'ADN, (j'ai tenter le mini-prep maison et le kit mini-prep biobasic) je n'obiens aucun ADN lors de la migration sur gel d'agarose. J'ai répété l'expérience plusieurs fois, à partir du début, ma superviseur a testé également les clones et à chaque fois, il n'y a pas d'ADN.  [...] Vous avez fais une transformation des mêmes cellules avec un autre vecteur Vous avez réussi à le récupérer avec le même protocole d'extraction et les mêmes solutions.  [...]