• Forum - Tampon, Forme, Protéine

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

J' ai fait plusieures purifs d'une protéine recombinante de 7 kDa. Elle se trouve dans un tampon Imidazole 500 mM. Je voudrai maintenant la concentré et la passer dans un tampon 50 mM phosphate. Question. est il possible de faire d'une pierre, deux coups et Quels sont le méthodes éfficaces pour concentré et /ou changer le tampon d'une protéine de 7 kDa.  [...] Cela peut aussi permettre de passer la protéine d'un tampon à un autre, il suffit d'éliminer une forte quantité de tampon (ne jamais faire arriver la protéine à sec) et d'ajouter à la quantité restante le tampon voulu. Avec cette méthode, la protéine reste sous forme native et soluble, contrairement aux méthodes de précipitations.  [...]

[Physiologie] Effet Hamburger: Transport du gaz carbonique sous forme combinée

Ion bicarbonate (système tampon), formé grâce à l'anhydrase carbonique dans l'érythrocyte, il réside principalement dans le plasma à la suite de l'échangeur (antiport) Cl-/HCO3- (protéine de bande 3, ou AE1 pour Anion Exchanger 1). C'est la forme principale de transport du CO2, représentant près de 60% du CO2 transporté dans le sang veineux mêlé.  [...] Liée à des protéines (composés carbamidés). le CO2 se combine à des groupements radicaux d'acides aminés de certaines protéines, au niveau des amines terminaux de certaines protéines contenues dans le sang, notamment l'hémoglobine (cabaminohémoglobine, à ne pas confondre avec la carboxyhémoglobine). Ce transport concerne environ 30% du CO2.  [...]

[Biochimie] propriétés de détergents

la protéine sur laquelle je bosse est exprimée sous forme de 5 variants (epissage + maturation par clivage). Lors de la lyse, ces différents variants se solubilisent différemment selon que j'utilise du chaps ou du lubrol WX dans le tampon. Mise à part le fait que.  [...] ...connaissez vous d'autres propriétés spécifiques à chacun de ces 2 détergents susceptibles d'expliquer leur capacité à solubiliser certaines protéines (ou membranes) plutot que d'autres.  [...]

[Génétique] Adn

voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une menbrane pour un test de type western. sachant ke la formulation de ce tampn est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( ja i reponde a la kestion) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...] voila le probleme. je dois preparer un tampon de transfert des proteine sur une membrane pour un test de type western. sachant que la formulation de ce tampon est. 25mM de tris, 192mM de glycine et 20%(V/v) de methanol. on demande comment preparer 500 ml de ce tampon ( j'ai deja repondu a cette question) ensuite, on demande a quoi ca sert le methanol dans ce tampon.  [...]

[Biochimie] problème de exercices biochimie ' peptide '

un heptapeptide issue de l'hydrolyse chymotrypsique d'une proteine montre qu'il renferme de l'asX, le PITC libére successivement un a.a qui forme des ponts disulfiriques dans les structures proteiques, un dexieme aa qui posséde une capacité tampon au ph physiologique et un aa non actif sur la lumiere polarisé, l'hydrolyse trypsique donne un tétrapeptide chargé positivement au ph physiologique et un tripeptide neutre et qui absorbe dans l'uv, l'hydrolyse en présence du CNBR donne un dipeptide qui apré hydrolyse acide totale ne libére qu'un seul a.a.  [...] pour le resultat de PITC. cystéine_histidine_gly. comment le PITC libére 3 aa et on a 7 aa, et comme le PITC s'attache au premier aa et le reste de la chaine reste intact.   [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

acides, protéases,... Enfin, le tampon permet de rester dans des conditions isotoniques qui contribuent au maintien de la forme native de ta protéine.  [...] Oui en se plaçant à un pH proche du pHi, on favorise la stabilité de la forme native de la protéine. En effet, la structure protéique est conditionnée par le pH qui va définir la charge des acides aminés déterminante pour la conformation finale de la protéine.  [...]

[Biochimie] Casser des aggrégats

Je travail sur des cellules eucaryotes, après avoir fait une extraction protéique, j'ai dénaturé certains de mes échantillons à 95°C, le souci est que j'ai inversé les tubes et la protéine que je veux voir forme des aggrégats lorsqu'on la dénature à 95°C.  [...] D'habitude, une fois le tampon de Laemmli ajouté, je dénature 1h à T° ambiante pour cette protéine. Et les résultats en western sont très satisfaisants, une belle bande.  [...]

dégradation de protéine recombinante

Si tu fais une gel filtration, c'est simple, tu concentres ta protéine autant que tu peux (dans un volume inférieur à 100 µl de preference). Tu fais ensuite circuler dans la colonne ton tampon A, tu injectes la protéine et les protéines se séparent toutes seules en fonction de la taille (les plus grosses d'abord, les plus petites après), il n'y a plus qu'a recuperer les fractions et trouver dans lesquelles se trouve la protéine.  [...] Si tu fais une echangeuse d'ions, ça ressemble beaucoup plus dans le principe à une colonne de Ni. C'est un peu plus compliqué à mettre au point, mais ça sépare souvent plus efficacement quand on sait s'en servir. Dans ce cas, tu fais circuler le même tampon A avec la protéine.  [...]

[Biochimie] Tampon de purification, NaCl et KCl

Je fais une purification par chromatographie d'affinité d'une protéine, qui était jusqu'à présent dans un tampon Tris + NaCl 0,4 M, du glycerol, et de l'imidazole.  [...] Ma question est donc. pourquoi la concentration de KCl dans un tampon est toujours plus faible que le NaCl Le KCl stabiliserait la protéine plus efficacement, et éviterait les interactions non spécifiques à concentration plus basse.  [...]

[Biochimie] Calcul de concentration de la protéine dans un échantillon (Exo L1)

le tampon de stockage utilisé et les autres acides aminés présents dans la protéine n'absorbent pas signifcativement la lumière UV à 280 nm.  [...] Enfin, pour la dernière question, l'hydrolyse acide d'une protéine a pour rôle de cliver la protéine en peptides. est-ce que cette méthode impacte sur la concentration en acides aminés que tu analyses ensuite.  [...]