• Forum - Tampon, Extraction, Protéines

[Biochimie] SDS page

aprés extraction des protéines. je n'arrive ppas à obtenir des bandes sur mon gel polyacrilamides. même si je précipite mes protéines avec l'acétone. il faut noter qu'il y à smire (trajectoir) sur mon gel. est ce que quelqu'un peut m'aider.  [...] le tampon phosphate permet l'extraction des protéine totales d'une poudre vegetale, au moin tu sera sure de l'existance de votres protéines, en plus c'est un protocol trés simple.  [...]

Isolat de protéines

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20).  [...] Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20). Tu précipites ensuite les protéines à l'éthanol à 95% mais le problème est que sa dénature.  [...]

[Biochimie] Congélation dans l’azote liquide puis conservation dans le congélateur -80c°

Ma question est la suivante. je dois laisser l'organisme dans l'azote liquide combien de temps au minimum Après l'avoir extrait de l'azote liquide, j'imagine que je dois le mettre immédiatement dans le congélateur réglé et mis en marche au préalable à -80 c°, mais au moment de l'analyse, quand j'extrais l'organisme du congélateur je dois attendre combien de temps pour la décongélation, et dans quelle température amiante doit s'effectuer la décongélation.   [...] Pour l'extraction de protéines sur tissus congelés, je laisse le tissu décongeler dans le tampon d'extraction à 0-4°C (dans la glace) en attendant le broyage.  [...]

[Divers] Intérêts du NaDOC, SS DNA, chelex, Tris Cl dans plusieurs expériences

Je réalise des ChIP (chromatin immunoprecipitation), et après extraction de l'ADN sur lequel les protéines ont été crosslinkées au formaldehyde, l'ADN est dans un tampon dit d'immunoprécipitation. celui-ci contient du NaDOC... à quoi cela sert-il.  [...] Je ne connais pas suffisement les protocoles que vous utilisez, cependant l'utilisation de Tris Cl sert milieu tampon. Il permet de conserver un ph régulier durant toutes vos expériences. Ainsi, travaillant avec de l'adn et des protéines, tous deux très semsibles aux changements de ph, vous évitez des dénaturations.  [...]

[Biochimie] Purification sur colonne et EDTA

Au labo, les purifications de protéines sont réalisées sur colonne de nickel et malgré l'étape de dialyse, il arrive régulièrement qu'il reste un peu d'EDTA (présent dans le tampon d'extraction), ce qui détruit la colonne.  [...] Peut-on titrer l'EDTA présent dans l'extrait protéique après dialyse et avant passage sur la colonne (sans utiliser tout l'extrait protéique bien sûr).  [...]

[Biologie Moléculaire] bleu de Laemmli... jaune

Regarde le wikipedia sur le bleu de bromophenol, il est jaune sous forme acide et vert sous forme basique. Si ton tampon n'est pas au bon pH, cela peut avoir des conséquences sur les protéines.  [...] Le tampon n'est pas au bon pH ou le processus d'extraction rend des protéines à un pH acide. Ça m'était arrivé quand j'en purifiais. Le bleu redevient bleu dans le gel parce que lui peut tamponner le faible volume de dépôt. Au pire vous ajoutez une goutte de tris 1M pH 9.  [...]

[Physiologie] Conservation de la matière fraîche

est ce que quelqu'un qui pourrait me dire comment peut-on conserver des feuilles fraîche. en effet je doit partir en stage de recherche dans 3mois, je travailles sur une espèce végétale et je doit faire pendant mon stage l'activité enzymatique de ces plantes, et je doit préparer et prendre avec moi de la matière végétale fraîche (Feuilles), comment pourrais-je consever cette matière sans dénaturer les protéines expliquez moi la méthode en détail, merci pour votre aide, c très important que quelqu'un m'aide.  [...] - Sinon, tu broies tes échantillons en poudre et tu les mélanges avec le tampon d'extraction. Tu les transportes alors en tubes à température ambiante. Pour les acides nucléiques ça ne risque pas grande chose mais pour les protéines, je ne sais pas. Je ne l'ai jamais fait.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Mais lorsque je dose ensuite mes protéines extraites, la BSA est utilisée dans la gamme étalon. Dans quelle mesure la BSA présente dans mes extraits (puisque dans le tampon d'extraction) ne va pas fausser la quantification des proteines extraites par la suite.  [...] Sauf que le BSA doit avoir précipité aussi et la reprise du culot va modifier la concentration en BSA parasite de mon extrait par rapport à la gamme étalon si je la fait dans mon tampon d'extraction (avec PVPP et BSA).  [...]

BL21 pour production protéines et extractions

J'aimerais extraire mes proteines recombinantes de mon mutant BL21, pour cela j'aimerais eviter les methodes classiques d'extraction (tampon et sonication).  [...] J'ai eu comme idée d'eclater les bactéries au micro onde, avez vous déjà testé Est ce que la proteine recombinante restera intacte Qu'en pensez vous Sinon quels sont vos protocoles d'extraction.  [...]

[Biochimie] migration sds page

je fais une extraction de cytosol total sur des plaquettes sanguines et je les dénature en les faisant bouillir avec un tampon glycérol/SDS avant de les faire migrer.  [...] alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...]