• Forum - Tampon, Extraction, Cellule

[Génétique] génie génétique - extraction d'ADN et PCR

le tris-hcl est un tampon biologique qui permet de maintenir le pH stable (il en existe d'autres du même genre. PBS, hepes, MOPS...) pour le NaCl je n'en suis pas certain mais j'imagine qu'il sert à maintenir une pression osmotique définie. S'il s'agit du tampon d'extraction il doit servir à faire éclater la cellule.  [...] Le NaCl était dans le tampon réactionnel Ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Je dois trouver le rôle de chacun des composants d'un tampon de lyse précédant l'extraction d'ADN (extraction phénol - chlorophorme) à partir de cellules animales. Quelqu'un pourrait-il me confirmer ou infirmer les rôles supposés.  [...] EDTA - chelateur d'ions bivalents - inhibition de nucléases et dénaturation de structures contenant du calcium.   [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je dois réaliser une extraction d'ADNg à partir de cellules de lignée lymphocytaire. Je possède déjà les culots cellulaires congelés, et j'ai déjà un protocole d'extraction phénol/choloroforme. Mon seul souci, c'est que je n'ai pas de tampon de lyse maison pour mes cellules, ni de protocole de lyse.  [...] Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.  [...]

Différence RT_PCR semi-quantitative et Q-PCR

- pour l'extraction des ARNm. est il possible de conserver les culots de cellules pendant quelques semaines à -80°C avant de faire l'extraction ou cela risque t'il d'abimer les ARN.  [...] il m'arrive qd je suis un peu la bourre dans les manips, de congele (-80°C)r mes cellules dans le tampon d'extraction utiliser lors de la purification d'ARN (tampon RLT du kit RNeasy de chez qiagen).  [...]

Isolat de protéines

Je ne pense pas que l'extraction de protéines varie tant que ça d'un matériau biologique à l'autre. Donc il suffit juste de faire un broyat de pois/soja. Tu broit dans un tampon avec si possible un inhibiteur de protéase. Tu récupère le surnageant, et puis ensuite l'extraction de protéines classique, avec un détergent doux de type Tween (80, 20).  [...] Moi ce que je ferai (et ce que je fais d'ailleurs ), c'est lyser les cellules tout simplement en utilisant un tampon dénaturant au contraire. Et ensuite, à partir de ce lysat je fais une extraction à l'éthanol mais ce sont deux choses différentes. tu as d'abord la lyse puis l'extraction.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines totales méthode de Bradford.

j'ai une question à vous poser, lors de la préparation de la gamme étalon SBA est ce qu'on utilise pour la dilution l'eau distillée ou le tampon avec lequel on a fait l'extraction des protéines.  [...] je ne parle pas d'ici de la dilution de l'échantillon,mais je parle de la dissolution de SBA.Est-elle dans de l'eau distillée ou dans le tampon d'extraction.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR après tri cellulaire au FACS

je souhaite réaliser un génotypage cellules spécifiques. Je vais donc marquer et trier des cellules au FACS, puis je réaliserai une PCR sur les cellules récupérées. Je voulais savoir dans quel tampon il était préférable de reprendre mes cellules pour réaliser la PCR à la suite.  [...] Le même tampon que celui du tri, puis tu centrifuge tes cellules et tu fais un culot sec si tu veux les stocker à -80 ou alors tu fais directement la lyse puis l'extraction d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

Tout comme un interrupteur, l'important est qu'il puisse etre allume ( on ), mais eteind aussi ( off ). Dans bon nombre de pathologie, dont le plus populaire, le cancer, la fonction off n'existe plus entrainant une proliferation excessive des cellules ainsi affectees et une colonisation de l'organisme dans le pire des cas.  [...] D'une maniere generale, lorsque tu cherches a montrer une phosphorylation, tu utilises des anti-phosphatases dans ton tampon d'extraction de la proteine ou de lyse des cellules. Rien ne t'empeche de l'utiliser dans ton lysat de reticulocyte. Celui utilise est souvent l'orthovanadate de sodium, tres efficace et spectre tres large.  [...]

[Biochimie] Role de la BSA dans une extraction protéique ??

Le protocole que je dois utiliser pour extraire une enzyme de la chair d'un fruit implique l'ajout de BSA dans le tampon d'extraction.  [...] Pour bien faire les choses, tu devrais réaliser ta gamme BSA étalon dans le tampon d'extraction, comme ça plus de problème avec la BSA du tampon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

Je soupçonne ma méthode d'extraction car l'échantillon avec lequel j'ai retrouvé la 2ème bande n'a pas été extrait de la même façon que ceux que j'ai analysé ensuite (robot Qiagen vs tampon maison + PK), même si ça n'explique pas pourquoi j'avais perdu cette bande pour cet échantillon (dégradation ).  [...] En plus c'est un protocole d'extraction très rapide (15 min avant PCR) et qui comprend aussi un mix tout près optimisé pour la PCR (tampon de dépot compris), enfin c'est pas pour leur faire de la pub mais si ça peut aider quelqu'un d'autre.  [...]