• Forum - Tampon, Extraction, ARN

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

1) J'ai des ARNs que je voudrait nettoyer. La DO 260/280 est bonne (. 2) mais je suis apparemment contaminé par les sels du tampon RLT (extraction sur colonne) puisque ma DO 260/230 n'est que de 1,3. Est-ce que vous pensez que ça peut poser un problème pour les envoyer en Q-RT-PCR Et si oui, pour éliminer ces sels, est-ce qu'une simple précipitation à l'isopropanol (+lavages à l'EtOH) suffirait.  [...] Pour l'extraction d'ARN, la contamination vient bien du fait que j'ai utilisé du tissu congelé (jeté dans le tampon RLT à 20°C). Le commercial m'a conseillé de chauffer les échantillons juste 5 min à 30°C après broyage puis de bien vortexer pour dissoudre les sels.  [...]

[Biologie Moléculaire] solubilité ADN, ARN dans le phénol

En fait, il faut savoir que les ARN sont sensibles au pH alcalin et en général, l'extraction ADN se fait en phenol/Chloroforme/IAA à pH 8 et nous aurons l'ADN en phase aqueuse avec les ARN endommagés, ce qui ne gêne pas pour certaines analyses mais pas pour d'autres d'où l'action de RNase dans certains cas.  [...] Et bien en fait cela dépend également du but de ta manipulation. Si tu fait une extraction d'ADN pour faire une PCR conventionnelle derrière, le fait qu'il y ait un peu d'ARN n'est pas vraiment grave. Puisque seul les ADN seront amplifié (je grossis la chose).  [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

la soude doit jouer le rôle de detergent pour détruire la membrane mais on doit un peu l'aider ( broyer ) on doit ajouter le tampon avec... apres ca doit etre la centrifugation différentielle pour séparer adn de arn et le tour est joué^^.  [...] oui d'abord il faut détruire les mbranes, le cytosol et le contenu du noyau vont donc se mélanger, la c'est au tour du dénaturant de faire effet, il doit y avoir qqchose en plus du tampon genre SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En gros pour faire c que tu veux faire, il faut un tampon classique d'extraction (Tris, Nacl, Triton, quelques inhibiteurs de phosphatase et de protéases). La difficulté est due a la taille de la FAS (230kDa je crois) donc il faudra faire un gel peu concentré (genre 8%) pour celle la et un plus concentré pour IR (10 ou 12%).  [...] un stock entre 2 et 10 est confortable. Tu peux diluer avec le même tampon qui a servi a l'extraction. D'ailleurs pour déposer en western, vu qu'il faut le même volume partout, il faut prélever une quantité d'échantillon et compléter tout le monde au meme volume avec ce tampon, c'est donc plus pratique d'en faire plus et de le conserver.  [...]

Problèmes PCR

(j'avais vérifié si mon extraction d'ARN était correcte avec un gel qui lui a fonctionné...).  [...] tu as probablement un probleme de concentration en sels dans ton gel ou dans ton tampon de migration. es tu sure de ne pas avoir utilisée du TBE/TAE 10X au lieu du 1X.  [...]

[Biologie Moléculaire] Conservation de tissus à -80°C

Dans les fait j'ai prélevé des tissus il y a 4 mois en vue d'une extraction simultanée protéines/ARN. J'ai eu à bosser sur autre chose entre temps et je commence à m'inquiéter un peu quand à l'intégrité de mes ARNs.  [...] Dipediou, c'est pas mal le RNA later (on en utilise d'ailleurs). Mais dans mon cas j'extraie les ARN et les protéines à partir des mêmes échantillons. Le RNA later ne permet pas d'extraire les protéines, donc je n'avais que le choix de la congélation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction ARN bactéries lactiques

Je cherche actuellement à extraire les ARN totaux de cellules de bactéries lactiques dans le but de faire de la RT-PCR quantitative (mesure de l'expression d'un gène dans différentes conditions).  [...] On utilise ca pour extraire les ARN totaux de cerveaux de souris et de nos cultures cellulaires (=. et donc pourquoi pas bactéries..).  [...]

Extraction d'acides nucléiques

J'aurais voulu connaître succinctement les principes généraux (et pas les protocoles..) des méthodes d'extraction de l'ADN plasmidique, ADN totaux, ADN chromosomique, ARN. Parmis les ARN peut on séparer les ARNr, ARNt et ARNm.  [...] Sinon a partir de la solution (extraction à partir de cellule de mammifere, levures etc..) de départ tu transformes des bacteries pour isoler le plasmide.  [...]

Banque d'ADN

Mais alors, comment extraire un gène d'intérêt de cette banque, sachant que ce gène a sans doute été découpé en morceaux par l'enzyme de restriction et cloné dans différents plasmides Et lorsque nous l'avons extrait, comment l'assembler de nouveau de manière à obtenir la séquence initiale.   [...] Pour faire des banques de gènes, il faut passer par une banque d'ADNc (extraction d'ARN puis Retro Transcription). Cette technique a par contre le désavantage de sur-représenter les gènes très exprimés dans la banque, et de posséder seulement certains patterns d'épissages (en particulier les patterns cellule-spécifiques).  [...]

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs

[Biologie Moléculaire] conservation sang total et ARNs.   [...] J'aimerai demander si la conservation du sang total à -4 ou -20C affecterait les ARNs circulants et le rendement de l'extraction de ces derniers et si vous pouvez m'indiquer la période et la température optimale de stockage/conservation des prélèvements sanguins qui permet de préserver les ARN.  [...]