• Forum - Tampon, éthanol, Membrane

[Biochimie] bruit de fond western blot

Je sais que nous on réutilise le méthanol dans lequel on a trempé la membrane car apparemment on a pas le choix d'utiliser du méthanol par contre pour le tampon de transfert, on peut utiliser de l'éthanol à la place du méthanol.  [...] Je confirme, méthanol pour mouiller la membrane c'est mieux, il suffit de tremper dans quelques ml sous la sorbonne, 30 sec juste histoire de mouiller la membrane, rien de si contraignant... Ensuite on peut la mettre à équilibrer dans le tampon de transfert pour lequel on utilise de l'éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] western blot /tampon de transfert

De plus le methanol peut etre facilement remplace par de l'ethanol voire supprime (sauf utilisation de membrane PVDF evidemment).  [...] Rapidement...pareil, pas d'ajustement de pH et remplacement du methanol par de l'ethanol. Le retrait de l'ethanol peut ameliorer le rendement de transfert de proteines de haut poids moleculaire. On peut supprimer l'ethanol avec les membranes de PVDF, pas conseille avec les membranes de nitrocellulose.  [...]

[Biologie Cellulaire] membrane PVDF et methanol

Ma question se situe surtout au niveau du tampon, est-ce qu'il doit contenir 20% de méthanol comme pour les membranes nitrocelluloses ou pas du tout de méthanol. j'ai lu des choses différentes et je ne sais pas trop quoi en penser.  [...] au niveau du tampon, il faut bien utiliser 20% d'éthanol, car j'ai lu des articles où ils ne mettaient pas d'éthanol dans le tampon sur une membrane PVDF. alors je me pose des questions.  [...]

[Divers] Contenu "Matériels et méthodes" - rapport stage M1

Les extraits protéiques sont dénaturés à 95°C pendant 5 minutes en présence de LSB 1X final avant d'être déposés sur un gel de polyacrylamide dénaturant à 6%. Les immunoprécipitations sont dénaturées à 95°C pendant 5 minutes dans 25 µl de LSB 2,5X. Après migration électrophorétique, les protéines sont transférées en milieu liquide sur une membrane de nitrocellulose (HybondTM C Extra, Amersham Bioscience) pendant 1h30 dans un tampon de transfert (50 mM Tris base, 40 mM Glycine, 1,3 mM SDS et 10% éthanol).  [...] Après transfert, la membrane est bloquée dans une solution de lait 5% TBS-Tween 0,2% pendant 1 heure à température ambiante sous agitation. Elle est ensuite incubée avec les anticorps primaires anti-BRCA1 monoclonal (D9) dilué au 1/500 (Sigma®), anti-HSP60 monoclonal (CK) au 1/1000 (Sigma®) pendant une nuit à 4°C sur une plaque rotative.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Ethanol. l'ADN est insoluble dans l'éthanol 70% ou 100%, son but sera d'éliminer les contaminants (du genre protéines, lipides...) tout en laissant l'ADN intact.  [...] Tampon de lyse. contient ce qui va lyser la cellule. Il contient souvent des protéases (clivent les protéines des parois) et des détergents (dissolvent les membranes). Cela permet de libérer tout le contenu cellulaire.  [...]

préparation de l'invertase

j aimerai bien savoir le rôle de chacun du tampon de citrate et le mélange toluène/éthanol dans la préparation de l'invertase à partir la levure de boulangerie.  [...] Il faudrait peut être savoir à quel moment interviennent le tampon et le mélange toluène/éthanol.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme purification sur gel d'agarose

tu as l'air de tout faire correctement... mon conseil serait d'ouvrir un kit nuef et de preparer toi meme le PE. et de prendre de nouvelles colones, il m'est arrivé des trucs bizarres avec certaines. Quand tu rajoutes ton tampon d'élution, il s'absorbe correctement sur la membrane.  [...] Par contre, la vitesse de centrifugation ne change rien du tout sur le rendement, et la deuxième étape de 1minute après PE ne sert que pour éviter d'avoir des traces d'éthanol dans l'éluat.  [...]

[Biologie Moléculaire] Kit Miniprep NucleoSpin Plasmid

Je crois pas qu'on puisse trouver la compo des buffers de MN ( vu qu'ils les vendent séparément pour une petite fortune..) mais par contre on peut connaitre ceux d'un kit similaire Qiagen. http.//www.qiagen.com/products/catal...-kit#resources.   [...] Super je vais regarder ça, mais je voudrait pas connaitre exactement la composition, juste savoir quel type de solution c'est, pour savoir comment elle agit sur la colonne, par exemple le tampon d'élution, par quel moyen décroche-t-il l'ADN de la colonne, etc.  [...]

[Biochimie] Transfert western blot raté

Apres activation, tu as mis équilibrer ta membrane dans le tampon de transfert (Les tampons de transfert doivent être à 4°C).  [...] Sinon, la conductivité électrique methanol est meilleure que celle de l'ethanol. En général on préfère remplacer le methanol par de l'ethanol, mais pour les transferts, c'est pas forcément la meilleure idée. Ceci dit je ne pense pas que cela joue à ce point, et puisque vous avez déjà eu de bons résultats.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

Premier souci, c'est la présence de l'odeur de l'éthanol, à noter que ce dernier est présent dans le deuxième réactif (sert pour lavage) de kit est ce que c'est normal.  [...] normalement, avant d'éluer (EB ou H2O) la colonne est centrifugée pour faire passer le tampon de lavage puis recentrifugée a vide. Normalement plus un poil d'ethanol.  [...]