• Forum - Tampon, Enzyme, Fonction

[Biologie Moléculaire] Digestion enzymatique

2- Il existe plusieurs tampons 10X de digestion enzymatique différents. De quelle façon choisit-on celui qui dooit être utilisé dans notre expérience.  [...] Les tampons sont choisis en fonction de leur compatibilité avec l'enzyme choisis, il existe des tableaux reprenant l'efficacité des enzymes (en %) en fonction du tampon utilisé.  [...]

[Biochimie] Une question de ph

je pense que la première proposition est fausse parce que l'enzyme va fonctionner aussi bien chez les deux populations du moment qu'elle est à son ph optimum.  [...] Si le pH de cette enzyme en fonction de la population, c'est dù tout simplement à l'adaptation de l'être humain en fonction des besoins (ceux qui sont en montagne auront plus d'hématies que ceux qui sont en plaine) mais leur pH ne va pas varier. Si dans les hépatocytes le pH varie, ça veut dire que ton sang a un pH différent des autres personnes or c'est embêtant d'avoir un pH acide ou basique, le pH du sang doit rester neutre (par son système tampon) et donc je ne pense pas que le pH varie en fonction des populations (c'est pas parce qu'il est chinois que son pH est un peu acide XD petite blagounette ^^).  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

Enfin les amorces servent a amplifier un fragment d'ADN spécifique dû a la complémentarité de l'amorce sur une région de la matrice et sert à l'enzyme pour démarrer son activité de polymérization. Sans amorce l'enzyme ne sait pas démarrer une polymérization.  [...] *Le tampon, c'est pour le bon fonctionnement de l'enzyme. il lui faut un pH particulier qui ne doit pas évoluer au court de la réaction. Or, les dNTP et l'ADN n'ont certainement pas les mêmes propriétés acidobasiques. d'où l'utilisation du tampon.  [...]

[Biochimie] Solution tampon

Dans les réactifs on trouve toujours un flacon d'enzymes ou de substrats et un falcon de la solution tampon.  [...] Une enzyme fonctionne de manière optimale a un certain pH, a une certaine concentration et type de sel, avec ou sans ions (Mg2+...)... La solution tampon est juste la solution dans laquelle l'enzyme accomplit sa fonction de manière optimale.  [...]

[Biologie Cellulaire] PCR et électrophorèse

Je réalise pour la première fois une PCR et une électrophorèse qui va avec et on me demande pourquoi le tampon de la Taq est-il coloré en vert et quel est l'avantage J'ai bien compris que le tampon était indispensable au bon fonctionnement de l'enzyme, mais je ne comprend pas bien l'histoire de la couleur Pour permettre une fluorescence et donc une révélation à l'électrophorèse.  [...] Vous mélangez deux choses. il faut traditionnellement un tampon de réaction, qui permet le fonctionnement de l'enzyme, et un tampon de dépôt, qui permet de stabiliser l'ADN et de déposer l'échantillon dans le puits.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Des PCR qui n'ont rien à voir ont été faites pour tester l'enzyme (Phusion), le tampon de l'enzyme, l'eau et les dNTP, tout a très bien fonctionné.  [...] sinon nous avons essayer des témoins positifs. un plasmide comprenant la s quence que nous cherchons et sa fonctionne mais avec de l'ADNc qui fonctionner cette été sa ne fonctionne plus alors que les 2 sont faits en meme temps avec le meme mix.  [...]

[enzymologie] Activité enzymatique et flux

J'aimerais tester l'activité d'une enzyme ainsi que quantifier le nombre de substrats transformé pour le comparer à d'autres conditions expérimentales (et voir en gros, dans quels conditions l'enzyme fonctionne à plein régime ).  [...] Tu peux essayer de réaliser une colonne enzymatique en incluant ton enzyme dans un résine et tester différents tampons, et entre chaque tampon il va falloir que tu laves avec un tampon de référence pour mesurer une activité de référence car certains tampons testés pourraient dénaturer ton enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR classique - PCR en temps réel !

La PCR, polymerase chain reaction, est un ensemble de réaction visant à amplifier un fragment d'ADN recherché. Pour faire court, on prend des amorces (Brins d'ARN) qui iront s'hybrider au début et à la fin du fragment que l'on veut amplifier. Grâce à une polymérase (Taq.   [...] ), l'ajout de nucléotides, tampon (pour les bonnes conditions de fonctionnement de l'enzyme) le fragment voulu sera répliqué en des milliers d'exemplaires.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation de Klenow

il faut inactiver l'enzyme préalablement, sinon elle va continuer a couper. Pas besoin de purifier le plasmide, tu peux le faire ensuite. Il faut quand même que la klenow puisse fonctionner dans le tampon utilisé pour la digestion.  [...] Par habitude, desactive toujours ton enzyme avant de faire autre chose car en changeant de tampon tu peux modifier la spécificité de son activité.  [...]

Problème lors de ligation

J'ai un plasmide pcDNA3 contenant un insert qui est situé entre deux sites de restrictions Xho I, je digère ce plasmide avec l'enzyme Xho I puis je fais migrer dans un gel TAE 1% avant de récupérer mon insert et mon plasmide ouvert ( grâce à un kit wizard).  [...] Je précise que j'ai vérifié qu'il n'y avais pas de conta dans la BSA ou le tampon on l'enzyme en réalisant un digestion sur un autre vecteur ou cela fonctionne.  [...]