• Forum - Tampon, Charge, échantillons

[Biologie Moléculaire] BET ou Bromure d'Ethidium...quelles aternatives ?

C'est un tampon de charge 6X qui se stocke à 4°C. Du coup on reprends les échantillons d'ADN avec ce tampon, et on ne met rien dans le gel. On fait d'une pierre deux coups.  [...] Dans le laboratoire ou j'ai effectué l'un de mes stages cette année, mon encadrant m'a montré la révélation sur gel avec le BET. Il prépare son gel d'agarose ave tampon TAE, et pour le refroidir il lui met de l'eau froide. Ensuite, quand il a considéré que c'était ''moins chaud'' il décida de mettre les quelques gouttes de BET dans le récipient.  [...]

[Biologie Moléculaire] Profil PCR/RAPD

je viens de procéder à une amplification PCR avec deux amorces différentes, pour chaque amorce j'ai utilisé un tampon de réaction différent juste pour voir ce que ça donnait lors de la migration (l'un coloré l'autre transparent).  [...] 1-les échantillons avec le tampon de réaction transparent auquel j'ai ajouté un tampon de charge n'ont rien donné= aucune bande, rien, nada.  [...]

[Biologie Moléculaire] Révélation des extraits d'ADN

Mais vous avez mis du bleu de charge dans vos ADN non Les bandes bleues c'est en vision directe ou après une quelconque révélation que vous n'expliquez pas.  [...] 3-parallèlement, j'ai préparer les échantillons à spoter en prélevant 7µl d'extraits d'ADN dissouts dans du TE, auxquels je rajoute 3µl de tampon de charge (Bleu de bromophénol).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Pour le depot du DNA loading buffer 10x de S prime (j'ai changé de lot durant mes manip sans changement apperent des résultats), j'en met 1/9 de mon échantillon pour optenir la dilution du tampon de charge au 1x.  [...] Sels dans l'échantillon. J'ai une fois résolu le problème par hasard en oubliant de mettre le courant après avoir chargé mon gel avec des échantillons que je savais chargés en sel. Les échantillons étaient sagement restés dans les puits pendant 4 heures et, pendant ce temps là, le sel avait eu le temps de diffuser dans le tampon.  [...]

[Biochimie] Clonage après purification sur gel

J'ai utilisé 3 types d'agarose de marque différentes, 3 kit de purification sur gel (Macherey & Nagel. Qiagen. produits chimiques / Millipore. Extraction par centrifugation sans produit pour fondre l'agarose). J'ai utilisé 3 ligases (NEB. Roche et Promega. tampons alicotés pour ne pas dégrader l'ATP).  [...] Ce protocole n'a fonctionné que 2 fois les 2 seules fois où mon boss me supervisait (la grosse loose...). Je suis même en train de suspecter le SYBR dans le gel ou le tampon de charge des échantillons tellement je suis désespéré.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS page

A quel moment Et bien comme normalement on a dû te l'expliquer si ton encadrant direct est reponsable. après avoir mis ton tampon de charge et juste avant de charger les échantillons sur ton gel. En général, on fait 5 min à 95C.  [...] C'est pourquoi je ne chauffe pas mes échantillons une nouvelle fois quand j'ai mis mon tampon de charge, devrais-je le faire quand même.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

deuxième souci, quand j'ai essai de spoter l'ADN dans le puits de gel, il se diffuse directement en dehors de puits dans le liquide de mogration (TBE), après j'ai changé le tampon de charge, et c'était marché avec quelque échantillons.  [...] Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge pour électrophorèse sur gel d'agarose

Le souci que je rencontre est que personne dans le labo ne sait quelle est la composition exacte du tampon de charge des échantillons pour le gel. (j'ai utilisé un aliquot laissé par la dernière personne ayant fait de la génétique au labo mais qui a depuis quitté les lieux).  [...] Ce qui est important c'est le dye (bleu de bromophenol generalement) pour suivre la migration et le sucrose/ficoll/glycerol qui permettent a tes echantillons d'aller au fond du puit lorsque que tu deposes.  [...]

[Biochimie] migration sds page

j'ai un souci pour mes wertern-blot. j'utilise des gels à 10% et je fais migrer à 100V environ 2h, enfin jusqu'à que mon front de migration soit OK. De plus, mes marqueurs de poids moléculaires (Broad Range de Bio-Rad) migrent aussi très bien. Mais à chaque fois mes échantillons ne migrent pas assez.  [...] alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Je viens de refaire un gel avec des tampons d'une collègue ainsi que son tampon de charge qui fonctionnent très bien ensemble. Mais visiblement dans mes mains non. J'ai toujours un front de migration flou et des bandes de protéines pas très nettes... *PAN*.  [...] Tu as bien un changement de couleur du tampon de chargement après les 5 min a 95 degrés et tu centrifuges bien tes échantillons après les avoir fait bouillir.  [...]