• Forum - Système, Répression, Glucose

[Biologie Moléculaire] L'opéron galactose

Je m'explique un peu. est ce que le mécanisme s'appuie sur la présence ou non de galactose, qui va inactiver un répresseur et permettre la transcription des gènes gal.  [...] Dans un ancien cours, j'ai trouvé cette briève explication. Il y a deux protéines régulatrices principales (GAL4 et GAL80) qui contrôlent l'expression des gènes. GAL1 (une kinase), GAL2 (une perméase) GAL7 (une transférase), GAL10 (une epimérase) et MEL1 (une galactosidase).   [...]

Promoteur Gal

Pour induire l'expression de ton promoteur GAl il te faut aucune trace de glucose. Car ce n'est pas une induction sous gal mais une repression par le glucose.  [...] Tu peux utiliser du raffinose (1 molecule de glucose+1molecule de galactose+ 1 molecule de fructose). Ce qui a l'avantage de ne pas trop effectuer la repression catabolique par le gluc, mais l'expression n'est pas fantastique, on fait ca en general pour permettre au levures de s'adapter a l'absence de glucose.  [...]

[Biotechnologie] Opéron lactose chez E.coli : induction au lactose ou à l'IPTG en bioréacteurs

Si ta souche est une delta lacZ, je ne pense pas que ca fasse une grosse difference entre lactose ou IPTG dans la mesure ou elle ne va pas metaboliser le lactose. Par contre pour avoir une full induction de Plac, il faut etre entre absence de glucose. Le glucose induit une repression catabolique via le cAMP et CRP.  [...] Si tu ajoutes de l'IPTG, tu va lever la repression, mais tu ne vas pas activer le systeme. Tu vas donc avoir une induction forte, mais pas au maximum. Si tu veux le maximum tu dois en plus de lever la repression (IPTG ou lactose) activer le systeme via CRP-cAMP.  [...]

Phénomene de diauxie

Quel mécanisme moléculaire est à l'origine de cette répression de l'opéron lactose ( je sais bien qu'il y a un répresseur de l'opéron lactose exprimé constitutivement mais pour que l'inhibition soit levé il faut que la perméase soit exprimé mais elle ne peut pas l'être puisque l'opéron est réprimé ).  [...] L'activation par CAP-AMPc est un peu moins immédiate. En fait, il faut qu'il y ait de l'AMPc dans la cellule. Or, le glucose empêche la production de l'AMPc intracellulaire. Donc, quand le glucose est dans la cellule, le complexe CAP-AMPc ne se forme pas, donc pas d'induction de l'opéron (outre le fait que la répression par LacI n'est pas levée).  [...]

[Biologie Moléculaire] Expression de protéines grâce au pGEX. DH5alpha ou BL21?

Conclusion. On peut produire des protéines en DH5alpha grâce aux vecteurs pGEX. Cependant la dégradation induite par les protéases ne semble pas négligeable. Le represseur LacI q du vecteur n'eteint pas totalement l'expression du gène chimère. Peut être un problème à prendre en considération pour les protéines toxiques.  [...] Si ton promoteur est un vrai Plac ou Ptac, tu peux rajouter du glucose a ton milieu. Ca va augmenter la repression et te donner un meilleur controle de l'induction.  [...]

[biologie moléculaire] opéron lactose

je demande essentielement lorsque par exemple je place une bactérie dont le genome n'est pas affécte par des mutations dans un milieu de culture qui ne contient pas des sources de nutrition (ne contient ni lactose ni la resultat de la catabolisme de ce dernier signifie du glucose et du galactose ),dans ce cas l'operateur est occupé par le represseure et par la suite pas de transcription,et d'aprés mes connaissance je sait que le gene lacA donne une protéine qui transforme des autres types des molécules en des analogues du lactose(par exemple le cholesterol)lors de l'epouisement de la cellule,mais comment se fait ce ci si l'operateure est bloqué par le represseure.  [...] j'ai repondu a votre question...meme le represseur ne se fixe pas a 100% sur l'operateur, et c'est un systeme dynamique dans le temps (meme en condition de repression), donc il n'est pas toujours present. Il arrive donc que la polymérase puisse transcrire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Répression de l'Opéron Lactose

c'est exact ce que je ne comprends pas, c'est que si le répresseur s'enlève, on a plus d'inhibition de la synthèse de protéines pour le métabolisme du glucose, si.  [...] En absence de lactose, la cellule métabolise le glucose, ou autre sucre préféré au lactose. L'opéron en donc réprimé à 99%. il faut tout de même une faible transcription basale pour permettre la synthèse de bêta-galactosidase et de lactose perméase, qui permettent la détection de l'allolactose, qui lui va enlever la répression du gène lorsque le lactose devient la source d'énergie pour la cellule.  [...]

[Microbiologie] Systeme d'expression chez E. coli

Il y a aussi le pQE-80L de Qiagen. C'est un T5 lacO-lacO et lacIq est porte par le plasmide. Tu as une grosse repression (presque 0) et une grosse activation (mais moindre que des systemes sans lacIq).  [...] Sinon y'a aussi des systemes de phage avec cI Ts mais ca t'oblige a changer la temperature (par contre la repression est top, l'induction aussi).  [...]

[Microbiologie] Yeast Two Hybrid System

Pour l'étude de l'interaction entre deux protéines bactériennes, j'aimerai réaliser des expériences de double hybride en levure (Y2H). Mon probléme, c'est que j'ai des difficultés a faire pousser mes cellules (Saccharomyces cerevisiae AH109) sur milieu solide YPAD, je n'arrive a obtenir que de miniscules colonies (des points) aprés 4 jours, je pense donc que ce sont des contaminants.   [...] BOn j'y connais rien aux levures et pas trop aux systemes hybrides, mais j'imagine que tu peux aussi bien faire le 2hybrid system dans milieu liquide non tu design le truc pour que l'intéraction des 2 protéine lève la répression d'une promoteur qui controle un gene de resistance ou truc du genre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gènes homéotiques

Bon maintenant que ca est clair, je rajoute une petite precision. le silencing decris specifiquement l'inactivation d'un gene par condensation de la chromatine. L'inactivation d'un gene par un represseur (facteur de repression) n'affecte en general pas la chromatine, mais agit plus en bloquant l'acces a l'ADN pour facteurs d'activation.  [...] Et enfin, les facteurs de stimulation (ou de répression) sont des protéines produites dans le cytoplasme, puis elles pénètrent dans le noyau...restent-elles fixées longtemps sur l'ADN pour par exemple stimuler un gène, quel est leur rôle exactement.  [...]