• Forum - Synthèse, ADN, ARN, Tampon

[Biologie Moléculaire] Mélange réactionnel à 42°C ?

je voudrais comprendre pourquoi, après avoir ajouté différentes protéines purifiées à partir d'une souche sauvage, un mélange réactionnel contenant l'ADN d'un bactériophage simple brin, des précurseurs pour la synthèse d'ADN et d'ARN et un tampon est incubé à 42 ° C.  [...] Mon prof a dit que c'était pour créer un choc thermique mais je ne comprend pas trop l'utilité d'incuber à cette température./.   [...]

[Biochimie] extraction ADN et ARN

J'aimerais avoir les rôles du tampon citrate-sel, le rôle de l'alcool à 95° sur l'ADN, le rôle du réactif de Dische, le rôle du TCA, de l'acétone, de l'orcétone (quelle différence entre l'orcétone acide et l'orcétone alcoolique) pour l'extraction de l'ARN.  [...] Pour l'éthanol, tout dépend de la technique d'extraction que tu utilises, si tu utilises des colonnes, ça améliore la fixation de l'ARN à la colonne (et sa sélectivité), j'imagine que c'est pareil pour l'ADN.  [...]

[Génétique] Principe de l'extraction d'ARN???

Ainsi il serait capable de se fixer à la colonne dans un tampon contenant peu d'eau, puis lorsque l'on rajoute l'eau à la fin il changerait de charge ce qui provoquerai son élution.  [...] L'ADN et les prot résiduelles sont éliminées par les lavages (RW1 et RPE). L'éthanol du tampon permet aussi d'éluer selectivement l'ADN afin de n'obtenir que l'ARN au final.  [...]

[Biochimie] PCR: a quoi servent les differents elements

Les amorces, bah ils vont se fixer à une séquence que tu souhaite et vont permettre de servir de point de départ pour qu'une ADN/ARN polymérase face son boulot.  [...] Les brins d'ADN et surtout ceux d'ARN sont très fragile, d'où l'utilisation de solution tampon pour éviter tout changement de pH pouvant ainsi casser la molécule ainsi pour avoir un pH qui sera optimum à l'action de la Taq Polymérase.  [...]

[Biotechnologie] Tampon de lyse

Ce tampon intervient directement après le lavage des cellules (bactéries ou cellules humaines), et à pour rôle de les détruire. Suivant ce que l'on veut faire ensuite (extraction protéines, ADN et/ou ARN), la composition du tampon varie, mais il contiendra généralement un détergeant afin de briser la membrane cellulaire et d'autre composants, également variables, mais aussi des sels et un pouvoir tampon au pH désirée.  [...] Bref, la composition du tampon de lyse est (très) variable suivant la manip' que l'on réalise, mais son rôle est généralement d'extraire notre produit en détruisant la cellule.  [...]

[Biochimie] A quoi ça sert?

la soude doit jouer le rôle de detergent pour détruire la membrane mais on doit un peu l'aider ( broyer ) on doit ajouter le tampon avec... apres ca doit etre la centrifugation différentielle pour séparer adn de arn et le tour est joué^^.  [...] oui d'abord il faut détruire les mbranes, le cytosol et le contenu du noyau vont donc se mélanger, la c'est au tour du dénaturant de faire effet, il doit y avoir qqchose en plus du tampon genre SDS.  [...]

[Biologie Moléculaire] conservation des ARN avec du tampon de dessalage ???

[Biologie Moléculaire] conservation des ARN avec du tampon de dessalage.  [...] J'aimerais savoir ce qui se passe lorsque l'on conserve au congélateur (-20°C) pendant 1 ou 2 jours (voire un peu plus) des ARN dans du tampon de dessalage. Sont-ils dégradés Gardent-ils la même structures que s'ils étaient conservés pures sans tampon de dessalage Est-il possible de les réutiliser pour des expériences.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Pour résumer. détruire les cellules (qui ont été lavées dans un tampon) à l'aide d'un détergeant (SDS trouvable dans le commerce), faire une première centrifugation courte pour faire descendre tout les débris cellulaires, prélever le surnageant (où il y a l'ADN et des protéines), puis faire précipiter l'ADN à l'aide d'Ethanol et d'acetate de sodium.  [...] Quand au gel, un simple gel d'agarose fait l'affaire, le tampon de migration phosphate est bon aussi. je crois qu'il est également possible de marquer l'ADN à l'aide de nitrate d'argent (vieux matériel photographique). Bref, à part l'étape de PCR, tout est théoriquement faisable dans la cuisine (ultra-propre pour éviter les contaminations ).  [...]

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Je voudrais connaître le rôle précis des composants du tampon d'extraction que j'utilise, the Edward Buffer, pour extraire l'ADN de pétunia.  [...] - EDTA. inhibiteur des métallo-enzymes comme les nucléases qui dégradent l'ADN. Il séquestre les ions magnésium Mg2+ et bloque ainsi l'activité de nombreuses nucléases qui sont dépendantes de cet ion.  [...]

[Biologie Moléculaire] échec de révélation sur gel d'agarose des produits d'ADN après purification

Le tampon de charge ne permet pas de précipiter l'ADN mais de le faire couler dans les puits. Êtes vous sure que vôtre système de migration ne présente pas un problème au niveau de la tension par exemple ou alors une électrode qui ne marcherait pas (est ce que ça fait des bulles).  [...] Normalement on lave avec un tampon qui doit contenir de l'éthanol mais l'ADN reste encore sur la silice de la colonne. On centrifuge pour éliminer l'éthanol et on recentrifuge la silice à vide pour finir de sécher (l'éthanol peut sinon faire des interférences lors du traitement de l'ADN pour le dosage ou la migration) On dépose ensuite de l'eau stérile ou alors un tampon d'élution sur la silice de la colonne(perso je préfère l'eau).  [...]