• Forum - Stocks, Levures, Compétentes, Culture

levures chimio-compétentes

Est-ce que quelq'un sait comment conserver à -80°C des levures rendues chimio-compétentes Un prtocole est-il connu ou est-ce que conserver les levures compétentes dans 15% de glycérol suffirait.  [...] C'est pour réaliser des stocks de levures compétentes et ne pas être obligé de remettre des levures en culture avant chaque transfo.  [...]

[Biologie Moléculaire] protocole pour rendre des levures compétentes

Je dois écrire un compte rendu de TP dans lequel nous devons indiquer le rôle des solutions (HEPES, DTT, eau stérile froide, sorbitol) utilisés pour rendre des cellules de levures compétentes. j'ai déjà fait pas mal de recherche sur internet, mais je n'ai trouvé que des protocoles semblables au notre mais pas à quoi serve les solutions utilisées. Alors aidez moi.  [...] Par exemple, je sais que le DTT est un agent réducteur et qu'il permet de réduire les ponts disulfure dans les protéines. Mais je ne comprends pas son rôle pour rendre des levures compétentes.  [...]

[Biologie Moléculaire] purif des proteines recombinantes apres coupure au facteur X

mais j'ai eu un probleme au niveau de la conservation des clones utilisés (cryoconservation dans le glycerole à -80°C), quand je relance une culture (peu de temps apres) à partire du glyerole (le glycerole est fait à partire de la préculture dans laquelle je n'ai pas encore mis l'IPTG), là c'est surprise mes bacteries poussent (dans un milieu LB Ampicilline) mais ils produisent moins la proteine (on dirai qu'elles perdent l'induction par l'IPTG) est ce qu'il y a quelqu'un qui a deja eu ce genre de probleme.  [...] Il faut que tu transformes de nouvelles bactéries compétentes la veille de ta purif. C'est le mieux à faire. Tu peux éventuellement garder ta boîte à 4°C 3-4 jours si tu veux refaire une culture après, mais pas plus.  [...]

isolation d'un plasmide

On récupère la culture de bactérie que l'on va traiter avec un detergeant ionique, le SDS et une la base forte, la soude. Ceci va dégrader les membranes et dénaturer les macromolécules (protéines + acides nucléiques).  [...] Les bactéries compétentes utilisées pour la transformation et l'amplification ne possédent pas de plasmides... pour t'en rendre compte, fait, à partir d'une colonie, une culture de bactéries non transformées d'une part et transformées d'autre part... fait ensuite une miniprep d'ADN plasmidique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de culture de bactéries

Lebacteries utilisés sont competente,mais pour des raisons diverses,hier on a effectué des culture sur TOP 10 avec transformation par choc thermique et ce matin,on a eu que des colonies bleues,les bacteries ne semblent pas avoir survecues et les seules survivantes n'ont pas integrer l'insert.  [...] Si tu veux, j'ai un protocole rapide pour fabriquer soit-même des compétentes pour électroporation, car tes stocks de compétentes sont peut-être nazes.  [...]

[Microbiologie] dégradation de l'ADN

2) je suis entrain de préparer des bactéries compétentes au moment ou j'ai voulu mesuré la densité optique à 600nm j'ai trouvé 0,828 et donc la phase exponentielle a été légèrement dépassée dîtes moi oui ou non si je dois poursuivre les étapes suivantes de protocole parce que je n'ai pas envie de jeter toute la culture pourrais je me rattrapper Si vous avez un cours sur le clonage envoyez le moi please.  [...] merci d'avoir répondu à mes questions, mais maintenant on doit se focaliser sur la dégradation D'ADN presque tous mes collègues rencontrent le même problème pour la souche Mycoplasma meleagridis sachez qu'on travaille dans les normes, je ne sais pas franchement à quoi est dû spécialement pour cette espèce, je me suis posée la question % à la présence de Dnase mais si c'étais le cas ça ne marcherait pas pour toutes les espèces aidez moi s'il vous plaît sachant qu'on utilise la méthode d'extraction d'adn au phénol chloroforme.   [...]

toxicité des vaccins - Page 4

Voilà, c'est plutôt ça qui est ma préoccupation. Et c'est pour ça que j'apprécie le temps que certains, comme Piwi, passent à tenter de discuter, d'expliquer le pourquoi du comment, et à accepter de remettre un peu en question certains points. Parce que même s'il est difficile à un citoyen lambda de tout comprendre (et je te donne raison sur le point de la culture scientique largement insuffisante que l'on a généralement), je trouve normal qu'on essaye de se faire une opinion de la manière la plus complète possible, et pas sur simple base de propos rassurants de la part des autorités compétentes.  [...] Ca doit effectivement faire partie des nombreux biais possibles, j'imagine... d'autant que, si mes souvenirs sont bons et mes lectures exactes, il existe un délai (très bref, de l'ordre de quelques jours si je ne m'abuse - info à vérifier) au-delà duquel les éventuels problèmes d'un patient ne peuvent de toute façon plus être comptabilisés comme effets secondaires du vaccin.   [...]

[Biologie Moléculaire] Tp biomol

Donc en fait dans le 1er on a transforme des bacteries E.Coli en leur inserant un plasmide pBR322. On obtient donc des bacteries competentes resistantes a l'ampiciline.  [...] Ensuite on a integre le melange avec ligase et sans ligase dans les bacteries competentes preparees prealablement. on les met en culture sur X-gal et ampiciline. On observe des colonnies blanches et bleues donc en fait ca c'est pas rapport a l'insert, si il vient s'inserer au niveau du lacZ la B-gal nest pas fonctionnelle et du coup on a des colonnies blanches, au cas contraire elles sont blanches.  [...]

[Microbiologie] Quelle souche d'E.coli pour préparer des cellules compétentes?

J'aurais besoin de rendre des cellules E.coli compétentes pour faire une transformation de plasmide mais je n'ai dans mes stock que la souche ATCC Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers (n° 8739).  [...] Encore mieux, la préparation de cellules compétentes avec du chlorure de rubidium en plus (cellules au moins 10x plus compétentes qu'avec le CaCl 2 ).  [...]

[Biologie Moléculaire] bactéries compétentes

Pensez-vous que le stockage à -20°C pendant 48h (au lieu de -80°C) de bactéries compétentes pourrait leur faire perdre toutes leurs compétences.  [...] A mon avis le plus important et la vitesse de congelation, plus que la temperature de conservation. Je pense que -20 ou -80 pour 48h ca ne change rien.   [...]