• Forum - Stock, Liquide, Bactéries

[Microbiologie] chloroforme dans la restriction/modification

lors de la réalisation d'un stock de phages en milieu liquide n incube dans un erlen des bacteries et des phages ( 1 pour 50 bactéries). On laisse notre culture à 37°C sous agitation et on prélève à intervalle de temps réguliers (30min) 1ml de façon a mesurer la DO.  [...] Une fois la DO stable on ajoute 5 de chloroforme dans l'erlen. on agite 30 sec et on laisse reposer sur la paillasse. Puis après on réalise le titrage du stock (dilutions successives et étalements avec géloses molles).  [...]

[Microbiologie] Problème de repiquage

Alors voilà, j'ai des bactéries stockées à 4°C (lactobacillus mucosae) dans une matrice de glycérol, je les repiques sur boite de pétri (milieu MRS) et je laisse incuber pendant 3 jours à 37°C, après les trois jours d'incubation je repique une colonie dans 5ml de MRS liquide et j'incube une nuit à 37°C et la le drame.  [...] Certaines personnes inoculent leur milieu liquide en prenant la colonie par l'intermédiaire d'un cône de micropipette et le jette dans le tube. Or desfois de l'anios mal essuyé sur la micropipette se retrouvent donc sur le cône, puis se dilue dans le milieu de culture, ce qui tuent les bactéries.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage

Il eut entendu parler de repiquer une culture liquide ou un glycérol stock sur boîte, est ce que quelqu'un saurait faire.  [...] Mon maitre de stage a entendu parler d'une technique pour mettre en culture sur boite une culture liquide mais il ne sait pas comment.  [...]

Repiquer des bactéries...

En fait, je cherche, dans un premier temps, juste à accroître le nombres de bactéries pour constituer un stock utilisable dans plusieurs expériences.  [...] Ce H2 doit correspondre aux petites bulles qu'on peut observer dans les cupules des galeries api un peu vieilles (au niveau des sucres)…………à moins que ce ne soit du CO2….et là j'ai un gros doute. lors de la fermentation des sucre par les bactéries, c'est du CO2 qui est produit, non.  [...]

amplification de phages

Lors de cette amplification du phage, nous ajoutons 100µl de CaCL2 + 100µl de solution de stock de phage à 5ml de bactéries. Puis on met sous agitation à 37°C pendant 24h.  [...] En général lorsqu'on cultive des bactérie en milieu liquide on met sous agitation de manière à oxygéné le milieu de culture et garder les bactéries en suspension. Il peut y a voir d'autres raisons (je n'ai pas souvent affaire aux bactéries ).  [...]

[Biologie Moléculaire] Production protéine ?

Je sais que ça m'avait pris la tête l'année dernière lorsque la protéine que ja voulais obtenir s'est révélée toxique pour les bactos et les a trucidées.   [...] Aussi, laisser les bactéries longtemps en phase stationnaire-like n'est pas super. elles pigent qu'elles doivent se serrer la ceinture et des protéines qui ne servent à rien (donc, ta protéine d'intérêt ) leur sert de stock d'aa.  [...]

[Microbiologie] conservation des phages

En effet je travail sur des bactériophages et j'essaye de les conservés. J'ai déjà fais des stock glycérol pour conserver mes bactéries. Mais c'Est la première fois que je travail avec des phages.  [...] Les lysats de phages se conservent au frigo quelques heures à quelques jours en fonction de leur stabilité. Tu devrais regarder dans les articles sur les phages de la même famille que le tien. Bon courage.   [...]

[Microbiologie] Lactobacilles

30 min à 5000g et resuspendre le culot dans du glycérol 40% stérile et stocker tes bactéries à -80°C. Dès que tu en auras besoin tu n'auras qu'à dégeler rapidement ce stock afin d'ensemencer tes milieux.  [...] Dans un congélateur classique à -20°C, la durée de vie des bactéries sera réduite, de plus je ne suis pas sur que le glycérol se congèle à cette température.  [...]

[Microbiologie] Quelle souche d'E.coli pour préparer des cellules compétentes?

Pensez bien à faire pousser un peu de bactéries vides pour vous refaire un stock de compétantes (au CaCl 2 ). Quite à dépenser un peu d'argent, autant ne pas avoir à le faire deux fois, même dans 10 ans.  [...] Vous amenez 100ml de bactérie à DO 0.4-0.5, vous mettez cela dans deux falcon 50 et vous laissez sur glace 10 min. Un tour de centri à froid pour culoter à 4000 rpm (faudrait pas que vos cellules pètent) et vous ajouter dans chacun des tubes 25ml de CaCl 2 50 mM fraichement préparé.  [...]

Cellules grasse récalcitrantes -adipocytes-

Ben la c un peu la meme chose tu stocke des graisses dans les cellules de stockage. les adipocytes, tu utilises cette graisse (periode de jeûne, effort physique de longue duré...) deux étapes diminution de la taille des dites cellules puis si tu continues encore à liquidé le stock alors apoptoses cellulaires.(Tout étant extrement schématique).  [...] Pour la chirurgie (ex. liposuccion), c'est un autre leurre. si tu enlèves exemple 3% de graisses à partir des cuisses, le corps va inévitablement restocker ce 3% ailleurs. Bref la femme qui se fait dégraisser le cul va se retrouver quelques mois plus tard avec le 3% de graisses dudit cul sous le menton ou ailleurs.  [...]