• Forum - Stock, Enzyme, Température ambiante

clonage/enzyme en dehors du site multiple de clonage

Bonjour à tous, je vous sollicite pour une petite question. Lors d'un TP, j'ai inséré un fragment d'ADN dans un plasmide et derrière, pour vérifier la ligation, j'ai digéré le plasmide avec les 2 enzymes de restriction utilisé à la base et après migration sur gel il se trouve que au lieu d'avoir 2 fragments attendus (un fragment correspondant à mon plasmide et un fragment correspondant à mon insert) je n'ai qu'une seule bande.  [...] Ou peut-être ta digestion n'a tout simplement pas fonctionné (problème de compatibilité enzymes/buffer, trop petit volume + évaporation, stock d'enzyme foutu si resté à température ambiante, etc).  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En fait, tes solutions stock pour le tampon de lyse, a quelle temperature sont-elles stockées A temperature ambiante ou a 4°.  [...] un stock entre 2 et 10 est confortable. Tu peux diluer avec le même tampon qui a servi a l'extraction. D'ailleurs pour déposer en western, vu qu'il faut le même volume partout, il faut prélever une quantité d'échantillon et compléter tout le monde au meme volume avec ce tampon, c'est donc plus pratique d'en faire plus et de le conserver.  [...]

[enzymologie] Activité enzymatique et flux

Tu peux essayer de réaliser une colonne enzymatique en incluant ton enzyme dans un résine et tester différents tampons, et entre chaque tampon il va falloir que tu laves avec un tampon de référence pour mesurer une activité de référence car certains tampons testés pourraient dénaturer ton enzyme.  [...] Pour cela on va chauffer l'enzyme en la mélangeant à une résine qui se liquéfie à une température de 40-42°, on applique le mélange dans une burette chaude et on fait goutter la burette dans le tampon initial de l'enzyme (Tris par exemple) à tempréature ambiante ou même plus froid.  [...]

[Biochimie] Sds page

Ce qui joue un rôle dans la polymérisation est bien le couple APS-TEMED. Les deux sont sensibles à la lumière, les garder à l'abri dans l'obscurité est mieux. On stockait la poudre d'APS à 4 degrés dans mon ancien labo, Température ambiante dans le nouveau.  [...] La solution stock d'APS (10%) était ensuite soit stocké en aliquot à -20, soit à 4 degrés, suivant la date d'utilisation. Mais tu te fiche de ce détail, vu que tu le prépares juste avant. Pour le TEMED, stockage à température ambiante à l'abri de la lumière.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ligation

Pour le clonage 1. oui j'ai testé over night, pendant 1h, 20 min (avec le tampon 2X ultra rapide soit disant)... pour la durée, j'ai tout testé. Les enzymes ne me paraissent pas trop rares, surtout XhoI avec laquelle j'ai déjà fait un clonage.  [...] Pour le clonage 2. SmaI oui je l'utilise à température ambiante (soit 25°C à peu près) et seulement après je rajoute l'autre enzyme à 37°C.  [...]

[Biologie Cellulaire] Détergeant Triton X-100, pourquoi faut t'il le garder au frais?

Je voulais savoir pourquoi il faillais manipuler le triton X-100 au frais, et ce qui se passe si on le chauffe modérément.   [...] Dans notre labo, il est stockée à température ambiante et utilisé à cette température également.  [...]

Comment maintient-on notre température en dessous température ambiante?

Cependant, mis à part peut-être s'il y a un peu de vent, il me semble qu'un liquide (dont nous sommes remplis..) va s'adapter à la température ambiante non Alors imaginons que notre corps reste 24h dans un milieu à 45°, que nous buvons de l'eau à 45°..etc.  [...] eh d'accord. En fait l'eau s'évapore malgré une température ambiante inférieure à T ébullition et elle se procure donc l'énergie nécessaire en nous prenant de la chaleur, c'est bien ça Ok, je n'avais jamais vraiment compris comment l'eau faisait pour s'évaporer dans de telles conditions (linge qui sèche, fond de verre qui s'évapore, etc..).  [...]

[Biochimie] Botulisme et pommes de terre ?

Les spores sont détruite à 120°C exposé durant 10 minutes, en dessous de cette température comme l'a dit Kamor les conditions seront favorable pour la transformation de la spore en bactérie et de ce fait le traitement thermique n'aurait servie à rien et l'aliment en question contiendrait de nouveau la bactérie puis si cet aliment est laissé à température ambiante pendant plusieurs heures il y aura production de toxines.  [...] A 100°C, le temps nécessaire peut être très long, donc il y aura plus de chance que des spores survivent. Après en la laissant à température ambiante, le milieu devient vivable pour la forme viable de botulinum.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de lyse extraction ADNg

Je sais qu'on peut utiliser un tampon de lyse avec du SDS et de la protéinase K, mais je n'ai aucune idée des proportions, ni du temps d'incubation, ni de la température à utiliser… Quelqu'un pourrait-il m'éclairer.  [...] Ensuite le volume à ajouter sur tes cellules est variable suivant le nombre de cellules, pour un nombre de cellules. 3.10^7 ajoute 0,3 ml de tampn de lyse et 1 ml si tu effectue ton extraction sur plus de cellules. Il te suffit ensuite d'incuber tes échantillon 12 à 18h à 50°C sous agitation dans des tubes bien fermés.   [...]

Error-prone PCR

Je cherche à faire de la mutagenèse aléatoire par PCR (du genre error-prone PCR) sur une séquence donnée. Avez-vous des protocoles éprouvés qui marchent bien pour vous.   [...] Ou alors tu gardes ton enzymes à température ambiante pendant un jour ou deux.  [...]