• Forum - Souche, Amorces, Sites

[Microbiologie] Gene

1) Cela veut dire que tu fais une PCR en utilisant l'ADN chromosomique de ta souche et des amorces qui reconnaissent deux sites spécifiques de ton gène X. A la fin de ta PCR tu fais migré le produit de ta PCR sur un gel d'agarose et si tu observe une bande (un amplicon, qui représente ton gène X ou une partie de celui-ci qui a été amplifié) cela veut dire que ton gène X est bien présent dans ton ADN chromosomique.  [...] 2) Blaster un gène, cela veut dire comparer la séquence nucléotidique de ton gène aux séquences nucléotidique de gènes présents dans une base de donnée. http.//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast..._LOC=blasthome.   [...]

PCR clonage

tu as essayé de réamplifier ton produit de PCR avec des amorces contenant des sites ou tu as recommencé a partir de la banque.  [...] mes amorces sont identiques, a part les sites de restcriction, c'est pr ca que les Tm sont élevé, mais est ce que je devais reduire de mes amorces pr que j'aie une Tm convenable.  [...]

[Biologie Moléculaire] Reverse transcriptase

Pour la Taq polymérase, il ne s'agit pas d'une rétro transcriptase, mais d'une DNApolymérase qui résiste aux hautes températures (Extraite de la bactérie Thermus aquaticus), que l'on utilise pour la PCR (Elle n'est pas la seule qui puisse être utilisé, tout dépend du but recherché lors de la PCR).   [...] Je suis actuellement en BTS bioac et bon vu que vous êtes surement dans la bio je voulais savoir si vous connaissez des domaines qui embauchent plus que d'autres en ce moment, recherche, agro, cosméto.   [...]

[Biologie Moléculaire] pcr sur colonies clonage

J'essaye de faire un TA cloning d'un insert (1500pb) dans un vecteur pcDNA3.1 je fais des PCR sur colonies à l'aide des amorces qui m'ont aidé à amplifier le cDNA donc je m'attend à une bande d'environ 1500pb mais à la place de sa j'ai une bandes d'environ 200pb sur presque tout mes clones.  [...] Quand je clone, je crible mes clones sur colonies et je ne séquence que 2 ou 3 clones qui sont positifs en PCR. D'ailleurs j'utilise toujours une amorce dans l'insert, l'autre dans le vecteur pour être sûr de la nature de mon vecteur, de mon insert, de la taille de mon insert et de sa position dans le vecteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage

Si tu fais une transformation avec 100ng de plasmide tu peux avoir beaucoup de transformants. Alors si tu peux 1micro gramme de plasmide que tu digères, s'il reste même moins de 10% de plasmide non digéré tu vas avoir des soucis lors de ta transfo.  [...] J'imagine que tu dessines tes amorces en incluant les sites de restriction. Rajoutes-tu des nucléotides supplémentaires sur ces primers (les sites de restriction aiment bien être entourés pour une bonne digestion).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique pour obtenir des amorces souche spécifique sans séquence du génome

Or pour cela je dois tout d'abord déterminer des amorces spécifiques de mes souches, le problème est que les génomes de mes bactéries n'ont jamais été séquencés à ce jour et il n'est pas pr évu car trop cher.  [...] Si tu cibles un gène très bien conservé chez d'autres souches bactériennes, tu peux designer tes amorces sur un consensus (à partir des leur séquences).  [...]

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

La RAPD est une technique de PCR permettant d'obtenir une empreinte spécifique à partir d'un génome donné. On utilise pour cela des amorces ayant une faible spécificité (elle s'accrochent à de multiples endroits de l'ADN). Comme tous les génomes sont différents, les sites de fixation des amorces seront variables d'un individu à l'autre.  [...] En amplifiant par PCR, on obtient alors une série de fragments. Comme les sites de fixations sont variables entre les individus, la longueur des fragments va aussi varier. L'étape finale est l'électrophorèse de ces fragments, qui permet d'obtenir une empreinte spécifique du génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Ensuite, il faut refaire une pcr en utilisant le résultat des deux pcr précédentes comme template et les amorces non mutées qui encadrent donc la région mutée et qui comprennent les deux sites de restriction. alors la c'est definitif je suis dans le champs, je vais attendre que l'image soit validee pour voir si ca m'eclaire.  [...] ok, alros pour mes amorces 3 et 4 il faut que je fasse attention a chevaucher un site de restriction de preference a bouts francs pour une fois mon doublet final obtenu pouvoir le remettre dans mon plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique SELEX aidez moi!

1. créer un grand oligonucléotide matrice avec trois choses. deux sites d'amorce sens et antisens. Un région centrale (20-25 ntd) que l'on synthétisera pour chacun des oligo de manière aléatoire.  [...] Ainsi on a une collection d'oligo de régions aléatoires portées sur des oligonucléotides bordés de sites d'hybridation pour deux amorces.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ajout de sites de restrictions

Ce qu'il faut faire c'est simplement prendre votre ORF et l'amplifier par PCR en ajoutant aux amorces les sites de restrictions+ 6 nucléotides aléatoires.  [...] En faisant comme cela, vous allez récupérer votre ORF borné par les sites de restriction. Vous n'aurez plus qu'à digérer et cloner directement dans votre plasmide d'intérêt.  [...]