• Forum - Sondes, Complémentaires, Membrane

Biotinylation dans l'hybridation inverse

donc si on considère que mettre en gras=biotinyler, pour une séquence double brin on aurait quelque chose comme ça, non (N= A ou C ou T ou G...mais de façon complémentaire pour que ça marche^^).  [...] comme ça, aps l'amplification on obtiendra uniquement des séquences A biotinylées (+ des séquences B non biotinylées), que l'on pourra mettre en évidence par hybridation avec des sondes complémentaires fixées sur une membrane grace à phosphatase alcaline+ streptavidine (on aura un précipité brun).  [...]

selection de cellules par la technique de l'hybridation in situ

L'hybridation in situ se fait effectivement sur des cellules mortes, sur lame, car il faut perméabiliser la membrane pour pouvoir faire rentrer les sondes... Les sondes sont des ARN complémentaires de ton ARN cible, couplées à un fluorophore par exemple, ou alors c'est des sondes chaudes (radioactives).  [...] On incorpore dans la sonde des UTP-dig. On revele ensuite avec un anticorps primaire anti-dig puis un anticorps secondaire couplé à la peroxydase. Enfin on ajoute au milieu deux reactifs (dont je vous eparge les noms complets) NBT et BCIP. Le produit de réaction est bleu/violet.  [...]

[Biologie Moléculaire] Un anticorps marqué par un fluorochrome peut-il se fixer à un acide nucléique?

l'ADN et l'ARN c'est des acides nucléiques donc ils sont plutot marqués par des sondes fabriquées avec des sequences complémentaires à celle qu'on veut regarder.  [...] Chaque fragment est représenté par un point (ou puce), ils servent de sond epour fixer de façon très spécifique les frag. de gènes complémentaire(cible) présent dans les échantillons biologique a tester.  [...]

FISH et mise en évidence de maladies géniques

à votre avis, est-ce que la technique de FISH qui utilise l'hybridation de sondes complémentaires d'une séquence d'intéret permet de mettre en évidence une mutation ponctuelle.  [...] une anomalie génique (et après en +, je ne comprends pas la limite entre les grosses mutations et les petites...ça se chiffre en combien de (kilos de) paires de bases ).   [...]

[Biologie Moléculaire] Méthode de diagnostic MLPA

Après hybridation parfaite du couple de sondes à la cible et ligature par l'ADN ligase, on réalise une PCR pour quantifier le nb de cibles présentes initialement en utilisant un seul couple d' amorces complémentaires aux séquences universelles notées X et Y.  [...] Ce que je ne comprends pas c'est comment on va pouvoir amplifier une séquence = la sonde, avec 2 amorces qui vont se lier aux 2 extrémités de cette même séquence Il ne faut pas respecter le sens 5'-3' (et donc, une amorce doit être complémentaire à X par exemple, et l'autre doit avoir la même séquence que Y).  [...]

Marche sur le chromosome

De nouvelles sondes complémentaires à des séquences du même fragment mais adjacentes au point de départ (clone BAC) sont synthétisées et ensuite utilisées pour identifier de nouveaux fragments de restriction chevauchant le point de départ initial. Le procédé est répété, en s'éloignant progressivement du point de départ.  [...] disons, lors de cette technique on utilise une sonde et cette sonde peut tomber sur l'ADN répété et comme on a des clones qui sont hybridés et hybridés entre eux dans d'autres endroits.Cela va probablement couper la marche.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

Mais si la sonde, qui est en quantité saturante je crois, rencontre un ADN de saumon à peu près complémentaire, pourquoi irait-elle voir ailleurs s'il n'y a pas un ADN qui lui correspond mieux.  [...] Par ailleurs, ne peut-on pas imaginer que lorsque l'on utilise des sondes courtes, on puisse trouver aussi des séquences exactement complémentaire de la sonde avec une probabilité élevée.  [...]

[Biologie Moléculaire] signal southern blot

Il y a quelques semaines j'ai coupé ma membrane en deux, j'ai hybridé la premiere partie avec un ancien tampon+sonde avec lequel j'avais obtenu de bon résultat.. et la deuxieme moitié avec le tampon et les sondes que j'utilise ces derniers moi.  [...] Es tu sur que la séquence de ta sonde est bonne J'ai déjà eu des surprises en commandant des amorces ou sonde. Mauvais copier coller, oubli, etc. Les causes d'erreur sont nombreuses.  [...]

Les empreintes génétiques !

Pour le cas des sondes, elles sont ajoutées lors du transfert des empreintes sur la membrane(le papier). Mais je m'avance pas plus parce que je ne sais pas très bien si c'est quelque chose comme ça que tu cherches.  [...] Il faut lire lyser les cellules, c'est à dire détruire les cellules pour libérer le contenu cellulaire, dont l'ADN. En gros ça consiste à dissoudre/fragmenter les membranes, à enlever les protéines, etc., dans des conditions qui permettent cependant de garder intact l'ADN, qui est récupéré au final. On lyse aussi des bactéries, des levures.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteur banque BAC

Si elle est sur gélose, tu fait une réplique sur membrane de nitrocellulose c'est à dire que tu découpes une membrane de nitrocellulose de la taille de la gélose, tu la déposes sur la gélose de manière à ce que les colonies fasse bien contact avec la réplique.  [...] Ainsi tu as des bactéries sur la membrane de nitrocellulose. Ensuite, tu réalise une hybridation de sondes chaudes spécifiques de ton promoteur, tu révèles en autoradiographie et tu vois quelles colonies sont marquées. Pour être sûr que ton promoteur est entier, tu peux éventuellement faire deux répliques.  [...]