• Forum - Sonde, ARNm, Intérêt

biologie moléculaire

j'aurais voulu savoir si quelqu'un était au clair sur la RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) et pourais m'indiquer un peu comment on fait ca.   [...] En revanche, ce que je peux te dire pour completer la reponse de yoyo, si tu allumes plusieurs bandes (de taille legerement differentes) sur un northern-blot avec une sonde spécifique de l'ARNm d'un gene d'interet, tu peux te poser la question si ces differents messagers de ton gene sont issues de debut de transcription different (ou bien autres possibilité). La RACE peut avoir son utilité dans ce cas.  [...]

[Biochimie] Analyse d'ARNm par protection a la RNAse A

J'en deduis donc que l'ARN pré-messager comporte 3 exons et donc 2 introns et que la taille de l'ARN messager d'interet est de 500+735+962. Est ce bon et est ce la bonne interpretation.  [...] P.S. On parle aussi d'une condition necessaire pour que le signal radioactif obtenu soit proportionnel à la quantité du transcrit d'interet dans le tissu... J'ai dit qu'il fallait introduire la sonde en excés molaire pour etre sur de récuperer tout les ARNm mais y a t-il une autre condition.  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquence validée pour sonde GAPDH

Je suis étudiant en thèse. Je suis actuellement en train de mettre au point un Northern blot afin de valider la spécificité d'une sonde pour mon gène d'intérêt, sonde que j'utiliserai ensuite pour étudier la néobiosynthèse des ARNm de ce gène par transcription run-off.  [...] Après de nombreuses recherches dans la littérature scientifique, je n'arrive pas à trouver une séquence de sonde publiée. J'ai de superbes images de Northern GAPDH, mais bien sûr, la séquence n'est jamais donnée dans le matériel et méthodes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Ces ADNc peuvent aussi servir de sondes radioactive (Northern ou Southern) pour détecter, voir doser un ARNm correspondant.  [...] Si les ARNm sont d'abord séparés par éléctrophorèse et qu'on utilise une sonde ADN marqués monocaténaire, il s'agit alors d'un northern blot qui permet de détecter un ARNm parmi les autres sans réaction de transcription inverse derrière. Northern blot et transcription inverse ne se réalise jamais en même temps.  [...]

Etudier l'expression d'ARN non codants

En ce qui concerne les ARNm il est facile de répondre le western blot puisqu'il y aura une protéine. Ou bien la RT-PCR avec une sonde poly-T puisqu'ils ont une queue poly-A (pour la plupart).  [...] Mais en ce qui concerne les ARN sans queue poly-A, par exemple les ARNm d'histone ou bien des longs ARN non codants comment faire au niveau de la RT-PCR Pas de sonde poly-T possible du coup.  [...]

[Microbiologie] le screening

bonjour a tous svp j'ai besoin daide,j'ai un exposé sur les methodes de recherche de nouvelles souches et je ne comprend pas c quoi le screening et il contient combien d'etapes j'ai trouvé qu'il ya un screening primaire et secondaire alors que je sais meme pas comment ça se deroule.   [...] je cherche les cellules souche microbienne(comment les isoler et les selectionner) et pour le screening je veux connaitre l'explication de cette methode en generale merci.   [...]

[bio mol] Séquencage. RFLP

2/ je ne saisie pas trop l'interet des sondes multilocus dans la méthode RFLP. Une sonde monolocus est utile pour différencier 2 individus par exemple, mais quel est l'interet d'explorer une soixantaine de locus chez un meme individu sans pouvoir différencier les 2 allèles.  [...] Les sondes monolocus sont déjà plus utiles. inspectant un seul locus, les chance de trouver le meme profil pour un locus sont beaucoup plus forte. surtout chez les personnes d'une meme famille. on les utilises ainsi pour les test de paternité.  [...]

Un problème de northern blot !

Les chercheurs de la publication réalisent un northern blot pour mettre en évidence la présence d'ARNm patB (hybridé avec une sonde), mais réalisent dans un second temps un northern blot témoin à l'aide d'ARNr 23S. Les données concernant l'ARNm patB sont ensuite dits normalisés par l'ARNr 23S et livrés sous forme de graphique.  [...] Les ARNr etant exprimes de facon quasi constantes dans les cellules. donc normaliser les resultats par rapport aux ARNr permet de t'assurer que si tu vois des variations d'intensites dans ton northern avec ton gene d'interet, cela ne proviens pas d'efficacite d'extraction differentes, d'efficacite de transfert sur la membrane differente, d'une degradation des ARN dans tone chantillon par une contamination par une RNAse etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Southern blot !!!

Plus précisément, si on ne l'utilise pas, on a des intéractions nitrocellulose-sonde parce que la membrane est chargée positivement (liaisons hydrogènes ou électrostatiques ) et que la sonde est ainsi bloquée.  [...] le but de la sonde est de detecter l'adn d'interet, alors pourquoi la préhybridation vu qu'elle va s'hybrider avec notre adn recherché.  [...]

Northern Blot

Sachant qu'au départ j'ai une sonde ADN complémentaire à l'ARNm étudié.  [...] Pour le northern-blot, tu fais directement migrer tes ARN purifiés ou non (soit des ARNtotaux, soit des ARN polyA+) sur gel d'agarose. Tu transfert sur une membrane et tu hybrides avec ta sonde.  [...]